| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩写词表 | 第8-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-33页 |
| 1.1 镁离子的化学特性 | 第16页 |
| 1.2 镁离子的生物学功能 | 第16-19页 |
| 1.3 镁离子转运的研究 | 第19-31页 |
| 1.3.1 原核生物镁离子转运系统 | 第20-27页 |
| 1.3.1.1 CorA镁离子转运系统 | 第21-23页 |
| 1.3.1.2 MgtA/B Mg~(2+)转运系统 | 第23-26页 |
| 1.3.1.3 MgtE镁离子转运系统 | 第26-27页 |
| 1.3.2 真核生物镁离子转运系统 | 第27-31页 |
| 1.3.2.1 酵母镁离子转运系统 | 第27-28页 |
| 1.3.2.2 哺乳动物镁离子转运系统 | 第28页 |
| 1.3.2.3 植物镁离子转运系统 | 第28-31页 |
| 1.4 本课题研究的意义 | 第31-33页 |
| 第二章 AtMGT6基因的克隆及序列分析 | 第33-41页 |
| 2.1 前言 | 第33-34页 |
| 2.2 材料与方法 | 第34-37页 |
| 2.2.1 实验材料与克隆载体 | 第34页 |
| 2.2.2 实验中所用酶、试剂及药品 | 第34-35页 |
| 2.2.3 生物信息学主要的分析软件与数据库 | 第35页 |
| 2.2.4 AtMGT6基因的cDNA克隆 | 第35-37页 |
| 2.2.5 AtMGT6基因的序列分析 | 第37页 |
| 2.3 结果 | 第37-38页 |
| 2.3.1 AtMGT6基因的cDNA克隆 | 第37-38页 |
| 2.3.2 AtMGT6基因序列的结构分析 | 第38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-41页 |
| 第三章 AtMGT6在细菌MM281互补系统中的功能分析 | 第41-52页 |
| 3.1 前言 | 第41-42页 |
| 3.2 材料与方法 | 第42-46页 |
| 3.2.1 实验材料与表达载体 | 第42页 |
| 3.2.2 试剂与培养基 | 第42-43页 |
| 3.2.3 数据分析软件 | 第43页 |
| 3.2.4 pTrc99A-AtMGT6表达载体的构建 | 第43页 |
| 3.2.5 MM281感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| 3.2.6 pTrc99A-AtMGT6转化MM281细胞 | 第44页 |
| 3.2.7 功能互补分析 | 第44-45页 |
| 3.2.8 MM281细胞吸收Mg~(2+)的活性分析 | 第45-46页 |
| 3.2.8.1 AtMGT6对Mg~(2+)亲和性分析 | 第45-46页 |
| 3.2.8.2 AtMGT6的离子选择性分析 | 第46页 |
| 3.3 结果 | 第46-50页 |
| 3.3.1 pTrc99A-AtMGT6表达载体的构建 | 第46页 |
| 3.3.2 AtMGT6功能互补MM281细菌突变株 | 第46-48页 |
| 3.3.3 AtMGT6是一低亲和性的Mg~(2+)转运蛋白 | 第48-49页 |
| 3.3.4 AtMGT6对其它二价金属离子也具转运能活性 | 第49-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 MGT6 RNAi植株的表型观察与分析 | 第52-69页 |
| 4.1 前言 | 第52-53页 |
| 4.2 材料与方法 | 第53-59页 |
| 4.2.1 植物材料与表达载体 | 第53-54页 |
| 4.2.2 各种培养基、酶及试剂 | 第54页 |
| 4.2.3 MGT6-RNAi转基因植株的筛选与鉴定 | 第54-58页 |
| 4.2.3.1 组成型AtMGT6-RNAi重组载体的构建 | 第54-55页 |
| 4.2.3.2 诱导型AtMGT6-RNAi重组载体的构建 | 第55页 |
| 4.2.3.3 MGT6-RNAi(C)植株的筛选与鉴定 | 第55-58页 |
| 4.2.3.4 MGT6-RNAi(I)植株的筛选与鉴定 | 第58页 |
| 4.2.4 MGT6-RNAi转基因植株的表型观察与分析 | 第58-59页 |
| 4.2.4.1 MGT6-RNAi(C)植株的表型观察 | 第58页 |
| 4.2.4.2 MGT6-RNAi(I)植株的表型观察 | 第58-59页 |
| 4.2.5 MGT6-RNAi转基因植株中Mg~(2+)含量的测定 | 第59页 |
| 4.2.6 MGT6-RNAi转基因植株的表型恢复 | 第59页 |
| 4.3 结果 | 第59-68页 |
| 4.3.1 MGT6-RNAi转基因植株的筛选与鉴定 | 第59-63页 |
| 4.3.1.1 MGT6-RNAi转基因(C)植株的筛选 | 第59-60页 |
| 4.3.1.2 MGT6-RNAi(I)植株的筛选 | 第60页 |
| 4.3.1.3 MGT6-RNAi转基因植株中AtMGT6转录水平的鉴定 | 第60-61页 |
| 4.3.1.4 MGT6-RNAi转基因植株中其它AtMGTs转录水平的鉴定 | 第61-63页 |
| 4.3.2 MGT6-RNAi转基因植株的表型观察 | 第63-65页 |
| 4.3.2.1 MGT6-RNAi(C)植株显现低镁表型 | 第63页 |
| 4.3.2.2 MGT6-RNAi(I)植株显现低镁表型 | 第63-65页 |
| 4.3.3 MGT6-RNAi转基因植株中Mg~(2+)含量明显降低 | 第65-66页 |
| 4.3.4 复镁后,MGT6-RNAi转基因植株的低镁表型得到恢复 | 第66-68页 |
| 4.4 讨论 | 第68-69页 |
| 第五章 AtMGT6基因的表达模式分析 | 第69-84页 |
| 5.1 前言 | 第69页 |
| 5.2 材料与方法 | 第69-77页 |
| 5.2.1 试验材料与表达载体 | 第69-70页 |
| 5.2.2 各种培养基、酶及试剂 | 第70-72页 |
| 5.2.3 AtMGT6基因的转录活性分析 | 第72-73页 |
| 5.2.3.1 低镁条件下,AtMGT6在拟南芥各组织中的转录活性分析 | 第72页 |
| 5.2.3.2 低镁诱导不同时间下,AtMGT6在拟南芥根中的转录活性分析 | 第72-73页 |
| 5.2.4 AtMGT6启动子的活性分析 | 第73-75页 |
| 5.2.4.1 AtMGT6基因启动子的扩增 | 第73页 |
| 5.2.4.2 ProAtMGT6::GUS转基因植物筛选 | 第73-74页 |
| 5.2.4.3 低镁条件下,AtMGT6启动子在ProAtMGT6::GUS转基因植株中的转录活性分析 | 第74-75页 |
| 5.2.5 AtMGT6基因的亚细胞定位 | 第75-77页 |
| 5.2.5.1 AtMGT6-GFP重组载体的构建 | 第75-76页 |
| 5.2.5.2 AtMGT6-GFP荧光信号的观察 | 第76-77页 |
| 5.3 结果 | 第77-82页 |
| 5.3.1 AtMGT6基因的转录活性受低镁诱导 | 第77-79页 |
| 5.3.2 AtMGT6启动子的活性受低镁诱导 | 第79-81页 |
| 5.3.3 AtMGT6定位于细胞质膜 | 第81-82页 |
| 5.4 讨论 | 第82-84页 |
| 第六章 AtMGT6基因的功能研究 | 第84-96页 |
| 6.1 前言 | 第84页 |
| 6.2 材料与方法 | 第84-86页 |
| 6.2.1 植物材料与表达载体 | 第84-85页 |
| 6.2.2 各种培养基及试剂 | 第85页 |
| 6.2.3 MGT6-RNAi转基因植株根、茎组织中Mg~(2+)含量的测定 | 第85页 |
| 6.2.4 AtMGT6在拟南芥细胞吸收Mg~(2+)的活性分析 | 第85-86页 |
| 6.2.4.1 ICP-MS测定拟南芥细胞中Mg~(2+)的吸收 | 第85-86页 |
| 6.2.4.2 ~(63)Ni~(2+)同位素测定拟南芥细胞中Mg~(2+)的吸收 | 第86页 |
| 6.3 结果 | 第86-93页 |
| 6.3.1 MGT6-RNAi转基因植株根、茎组织中Mg~(2+)含量明显降低 | 第86-87页 |
| 6.3.2 MGT6-RNAi转基因植株根部Mg~(2+)吸收被抑制 | 第87-91页 |
| 6.3.2.1 ICP-MS结果显示MGT6-RNAi转基因植株根部Mg~(2+)吸收被抑制 | 第87-90页 |
| 6.3.2.2 63Ni~(2+)同位素结果显示MGT6-RNAi转基因植株根部Mg~(2+)吸收被抑制 | 第90-91页 |
| 6.3.3 AtMGT6基因介导植物根部Mg~(2+)的吸收 | 第91-93页 |
| 6.4 讨论 | 第93-96页 |
| 第七章 主要研究结论及进一步研究设想 | 第96-98页 |
| 7.1 主要研究结论 | 第96页 |
| 7.2 进一步研究设想 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-106页 |
| 论文发表情况 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
