| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 第一章 绪论 | 第24-59页 |
| 1.1 生物催化的意义与发展趋势 | 第24-25页 |
| 1.2 脂肪酶催化机制及应用 | 第25-35页 |
| 1.2.1 脂肪酶结构及催化机理 | 第25-27页 |
| 1.2.2 脂肪酶固定化 | 第27-35页 |
| 1.2.2.1 脂肪酶固定化方法 | 第27-33页 |
| 1.2.2.2 固定化对脂肪酶活性的影响 | 第33-35页 |
| 1.3 脂肪酶催化合成 | 第35-43页 |
| 1.3.1 脂肪酶催化酯化合成 | 第35-39页 |
| 1.3.1.1 生物柴油合成 | 第37-38页 |
| 1.3.1.2 脂肪酶催化酯化合成油酸乙酯 | 第38-39页 |
| 1.3.2 酶混杂性(Enzyme promiscuity) | 第39-43页 |
| 1.3.2.1 混杂催化(catalytic promiscuity)实例 | 第40-42页 |
| 1.3.2.2 混杂催化机理 | 第42-43页 |
| 1.4 典型脂肪酶催化研究介绍 | 第43-50页 |
| 1.4.1 几种重要脂肪酶的构效特性 | 第43-46页 |
| 1.4.2 Yarrowia lipolytica脂肪酶研究概况 | 第46-50页 |
| 1.5 核酸催化 | 第50-56页 |
| 1.5.1 一般催化剂对Knoevenagel缩合反应的催化 | 第50-53页 |
| 1.5.2 基于DNA的不对称合成(DNA-Based Asymmetric Synthesis) | 第53-54页 |
| 1.5.3 RNA催化(RNA-based catalysis) | 第54-56页 |
| 1.6 论文选题的目的与意义 | 第56-57页 |
| 1.6.1 廉价无纺布载体及Yarrowia lipolytica脂肪酶发酵液为来源的脂肪酶固定化工艺的改进 | 第56页 |
| 1.6.2 生物催化Knoevenagel缩合反应机理分析 | 第56-57页 |
| 1.7 论文的研究思路及研究内容 | 第57-59页 |
| 1.7.1 论文的研究思路 | 第57页 |
| 1.7.2 论文的研究内容 | 第57-59页 |
| 第二章 脂肪酶固定化方法 | 第59-79页 |
| 2.1 引言 | 第59-60页 |
| 2.2 实验部分 | 第60-63页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第60页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第60-63页 |
| 2.2.2.1 纤维载体脂肪酶固定化 | 第60-61页 |
| 2.2.2.2 聚氨酯吸附固定化 | 第61页 |
| 2.2.2.3 两亲高分子包覆Fe_3O_4纳米复合球直接吸附固定化 | 第61-62页 |
| 2.2.2.4 脂肪酶水解活力测定 | 第62页 |
| 2.2.2.5 酯化反应条件 | 第62页 |
| 2.2.2.6 形貌表征 | 第62页 |
| 2.2.2.7 蛋白负载量测定 | 第62页 |
| 2.2.2.8 醛基含量测定 | 第62-63页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第63-77页 |
| 2.3.1 无纺布筛选 | 第63-68页 |
| 2.3.1.1 载体形貌表征 | 第63-65页 |
| 2.3.1.2 酶固定化参数及其催化性能 | 第65-68页 |
| 2.3.2 酶固定化后疏水整理方法 | 第68-71页 |
| 2.3.3 其他载体固定化脂肪酶 | 第71-77页 |
| 2.3.3.1 廉价聚氨酯载体固定化 | 第71-73页 |
| 2.3.3.2 两亲高分子包覆Fe_3O_4纳米复合球载体直接吸附固定化 | 第73-77页 |
| 2.4 本章小结 | 第77-79页 |
| 第三章 疏水整理发酵液固定化酶催化酯类合成 | 第79-97页 |
| 3.1 引言 | 第79-80页 |
| 3.2 实验部分 | 第80-83页 |
| 3.2.1 材料与试剂 | 第80页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第80-83页 |
| 3.2.2.1 脂肪酶的固定化方法 | 第80页 |
| 3.2.2.2 脂肪酶水解酶活测定 | 第80-81页 |
| 3.2.2.3 pH值、温度和有机溶剂对固定化酶活力和稳定性的影响 | 第81页 |
| 3.2.2.4 油酸乙酯酯化合成 | 第81-82页 |
| 3.2.2.5 水、乙醇含量测定 | 第82页 |
| 3.2.2.6 十二酸十二醇反应中测定批次反应中载体上蛋白的脱落 | 第82页 |
| 3.2.2.7 维生素A棕榈酸酯、棕榈酸异辛酯的酯化合成 | 第82页 |
| 3.2.2.8 物理表征 | 第82-83页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第83-96页 |
| 3.3.1 基于酶活完全利用的脂肪酶发酵液固定化方法 | 第83-85页 |
| 3.3.2 催化无溶剂油酸乙酯酯化 | 第85-91页 |
| 3.3.2.1 反应动力学 | 第85-88页 |
| 3.3.2.2 疏水固定化酶5L BSTR中的催化应用 | 第88-91页 |
| 3.3.3 其他酯化反应的催化 | 第91-92页 |
| 3.3.4 疏水整理固定化酶的性质 | 第92-94页 |
| 3.3.4.1 pH值、温度对固定化酶活力和稳定性的影响 | 第92-93页 |
| 3.3.4.2 固定化酶有机溶剂耐受性 | 第93-94页 |
| 3.3.5 疏水整理固定化酶表征 | 第94-96页 |
| 3.3.5.1 pNPP水解动力学 | 第94页 |
| 3.3.5.2 表面元素及结构表征 | 第94-96页 |
| 3.4 本章小结 | 第96-97页 |
| 第四章 天然碱性氨基酸中性盐和脂肪酶催化Knoevenagel缩合反应及其机理分析 | 第97-121页 |
| 4.1 天然碱性氨基酸中性盐高效催化 | 第97-107页 |
| 4.1.1 前言 | 第97页 |
| 4.1.2 实验部分 | 第97-100页 |
| 4.1.2.1 材料与试剂 | 第98页 |
| 4.1.2.2 实验方法 | 第98-99页 |
| 4.1.2.3 产物的GC-MS数据 | 第99-100页 |
| 4.1.3 实验结果与讨论 | 第100-107页 |
| 4.1.3.1 水含量对游离碱性和中性盐两种形式的碱性氨基酸催化活力的影响 | 第100-102页 |
| 4.1.3.2 加水(4%)乙醇中反应时间进程 | 第102-103页 |
| 4.1.3.3 中性氨基酸盐的FTIR | 第103-104页 |
| 4.1.3.4 Lys和Lys·HCl催化底物范围研究 | 第104-105页 |
| 4.1.3.5 同PPL催化性能的比较 | 第105-107页 |
| 4.2 脂肪酶催化混杂(catalytic promiscuity)能力的分析 | 第107-120页 |
| 4.2.1 前言 | 第107-108页 |
| 4.2.2 实验部分 | 第108-112页 |
| 4.2.2.1 材料与试剂 | 第108-109页 |
| 4.2.2.2 实验方法 | 第109-110页 |
| 4.2.2.3 双底物催化理论 | 第110-112页 |
| 4.2.3 实验结果 | 第112-118页 |
| 4.2.3.1 脂肪酶制剂 | 第112页 |
| 4.2.3.2 水含量对酶催化速率影响 | 第112-113页 |
| 4.2.3.3 脂肪酶对氰乙酸乙酯水解的验证 | 第113-114页 |
| 4.2.3.4 脂肪酶催化特异性的验证 | 第114页 |
| 4.2.3.5 简单碱性催化剂催化反应 | 第114-115页 |
| 4.2.3.6 底物1+3自发缩合动力学 | 第115-116页 |
| 4.2.3.7 脂肪酶催化1+2和1+3缩合动力学 | 第116-118页 |
| 4.2.4 结果分析与讨论 | 第118-120页 |
| 4.2.4.1 乙醇-水中的自发缩合 | 第118页 |
| 4.2.4.2 非特异性缩合(简单催化剂和BSA) | 第118-119页 |
| 4.2.4.3 特异性缩合(脂肪酶) | 第119-120页 |
| 4.3 本章小结 | 第120-121页 |
| 第五章 核酸催化Knoevenagel缩合反应动力学机理分析 | 第121-136页 |
| 5.1 引言 | 第121页 |
| 5.2 实验部分 | 第121-124页 |
| 5.2.1 材料与试剂 | 第121-122页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第122-124页 |
| 5.2.2.1 催化剂制备 | 第122页 |
| 5.2.2.2 催化反应条件 | 第122页 |
| 5.2.2.3 产物分析/表征 | 第122页 |
| 5.2.2.4 物理表征方法 | 第122-123页 |
| 5.2.2.5 动力学研究 | 第123-124页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第124-135页 |
| 5.3.1 核酸盐对比脂肪酶、氨基酸盐的催化活力 | 第124-125页 |
| 5.3.2 核酸以及脂肪酶底物催化范围的比较 | 第125-126页 |
| 5.3.3 核酸碱基组成以及高级结构对反应催化的影响 | 第126-130页 |
| 5.3.3.1 核酸碱基组成对反应催化的影响 | 第126-128页 |
| 5.3.3.2 核酸高级结构对反应催化的影响 | 第128-130页 |
| 5.3.4 核酸盐催化动力学及机理分析 | 第130-135页 |
| 5.3.4.1 核酸盐催化动力学 | 第130-133页 |
| 5.3.4.2 光谱分析核酸盐构象 | 第133-134页 |
| 5.3.4.3 核酸盐催化机理推测 | 第134-135页 |
| 5.4 本章小结 | 第135-136页 |
| 第六章 结论 | 第136-138页 |
| 本论文创新点 | 第138-139页 |
| 问题与建议 | 第139-140页 |
| 参考文献 | 第140-159页 |
| 致谢 | 第159-160页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第160-162页 |
| 作者和导师简介 | 第162-163页 |
| 附件 | 第163-164页 |
