| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 线粒体的机能与人类健康 | 第8-9页 |
| 1.2 PPR蛋白与人类疾病 | 第9-10页 |
| 1.3 PPR蛋白的结构特点及功能 | 第10-12页 |
| 1.4 线粒体的翻译机器 | 第12-13页 |
| 1.5 粟酒裂殖酵母做为模式生物的优点 | 第13-14页 |
| 第二章 粟酒裂殖酵母ppr10基因功能的研究 | 第14-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-16页 |
| 2.1.1 菌种 | 第14页 |
| 2.1.2 培养基及相关试剂 | 第14-15页 |
| 2.1.3 引物设计 | 第15-16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-22页 |
| 2.2.1 野生型菌株yHL6381和yHH1点菌实验 | 第16-17页 |
| 2.2.2 ppr10缺失菌株存活率测定 | 第17页 |
| 2.2.3 S.pombe总RNA的提取 | 第17-18页 |
| 2.2.4 RNA的质量检测 | 第18页 |
| 2.2.5 cDNA模板的获得 | 第18-19页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR | 第19页 |
| 2.2.7 S.pombe线粒体提取方法 | 第19-20页 |
| 2.2.8 线粒体RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.9 RNA免疫共沉淀(RIP)方法 | 第21-22页 |
| 2.3 结果与分析 | 第22-26页 |
| 2.3.1 ppr10缺失菌在稳定期后期大量死亡 | 第22-23页 |
| 2.3.2 ppr10缺失菌存活率下降 | 第23页 |
| 2.3.3 Ppr10不影响线粒体编码的mRNAs的稳定 | 第23-25页 |
| 2.3.4 Ppr10与线粒体编码的mRNAs存在相互作用 | 第25-26页 |
| 2.4 本章小结 | 第26-28页 |
| 第三章 Ppr10与Mpa1相互作用的研究 | 第28-65页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-35页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第28-31页 |
| 3.1.2 培养基与相关试剂 | 第31-34页 |
| 3.1.3 引物设计 | 第34-35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-46页 |
| 3.2.1 串联亲和纯化(TAP)Ppr10蛋白复合体 | 第35-36页 |
| 3.2.2 银染检测蛋白复合体的组分 | 第36页 |
| 3.2.3 质谱鉴定蛋白复合体组分 | 第36-37页 |
| 3.2.4 ppr10-myc-KanMX重组质粒的构建 | 第37-39页 |
| 3.2.5 E.coli TOP10化转感受态细胞的制取 | 第39-40页 |
| 3.2.6 将重组质粒重组质粒转入E.coli TOP10感受态细胞 | 第40页 |
| 3.2.7 碱变性法抽提重组质粒 | 第40页 |
| 3.2.8 上游重组质粒的酶切验证 | 第40-41页 |
| 3.2.9 下游重组质粒的构建 | 第41页 |
| 3.2.10 yYJ1,yYJ2,yYJ3菌株的筛选以及表达检测 | 第41-42页 |
| 3.2.11 粟酒裂殖酵母基因组的提取 | 第42页 |
| 3.2.12 运用anti-c-Myc琼脂糖珠检测Ppr10与Mpa1的相互作用 | 第42-43页 |
| 3.2.13 运用anti-HA琼脂糖珠检测Ppr10与Mpa1的相互作用 | 第43-44页 |
| 3.2.14 蛋白液中RNA消化后检测Ppr10与Mpa1的相互作用 | 第44页 |
| 3.2.15 Western Blot法检测蛋白的相互作用 | 第44-45页 |
| 3.2.16 ppr10-myc-ura4质粒的构建 | 第45-46页 |
| 3.2.17 碱裂解法制备酵母总蛋白 | 第46页 |
| 3.3 结果与分析 | 第46-63页 |
| 3.3.1 串联亲和纯化Ppr10蛋白复合体及组分鉴定 | 第46-50页 |
| 3.3.2 重组质粒及相关菌株构建 | 第50-56页 |
| 3.3.3 免疫共沉淀检测Ppr10与Mpa1的相互作用 | 第56-57页 |
| 3.3.4 反向免疫共沉淀检测Ppr10与Mpa1的相互作用 | 第57页 |
| 3.3.5 将蛋白复合体中RNA消化后Ppr10与Mpa1的相互作用 | 第57-58页 |
| 3.3.6 Mpa1不影响线粒体RNA的稳定性 | 第58-60页 |
| 3.3.7 Mpa1缺失导致Ppr10蛋白水平的减少 | 第60-61页 |
| 3.3.8 回补Mpa1使Ppr10蛋白水平恢复正常 | 第61页 |
| 3.3.9 Mpa1缺失不影响ppr10 mRNA的水平 | 第61-62页 |
| 3.3.10 Ppr10的缺失不影响Mpa1的稳定 | 第62-63页 |
| 3.3.11 Ppr10在Mpa1缺失菌体内被Lon1降解 | 第63页 |
| 3.4 本章小结 | 第63-65页 |
| 第四章 Ppr10与线粒体翻译起始因子相互作用的研究 | 第65-77页 |
| 4.1. 实验材料 | 第65-67页 |
| 4.1.1 菌种和质粒 | 第65页 |
| 4.1.2 培养基与相关试剂 | 第65-67页 |
| 4.1.3 引物设计 | 第67页 |
| 4.2 重组质粒的构建 | 第67-70页 |
| 4.2.1 mti2-FLAG-ura4重组质粒的构建 | 第67-69页 |
| 4.2.2 运用anti-c-Myc琼脂糖珠检测Ppr10与Mti2的相互作用 | 第69-70页 |
| 4.2.3 Western-Blot方法分析蛋白相互作用 | 第70页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第70-75页 |
| 4.3.1 mti2-FLAG-ura4重组质粒的构建 | 第70-71页 |
| 4.3.2 yYJ11与yYJ12菌株构建 | 第71-72页 |
| 4.3.3 免疫共沉淀证明Ppr10与Mti2存在相互作用 | 第72-73页 |
| 4.3.4 蛋白液中RNA消化后检测Ppr10与Mti2存在相互作用 | 第73-74页 |
| 4.3.5 免疫共沉淀证明Ppr10与Mti3不存在相互作用 | 第74页 |
| 4.3.6 粟酒裂殖酵母原位加标签不影响蛋白功能 | 第74-75页 |
| 4.4 本章小结 | 第75-77页 |
| 第五章 全文总结 | 第77-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 附录一 主要仪器 | 第86-87页 |
| 附录二 本实验所用的质粒 | 第87-88页 |
| 附录三 本实验所用的菌种 | 第88-91页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
