| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第12-27页 |
| 1.1 毛细管电泳技术概述 | 第12-13页 |
| 1.2 毛细管电泳在线富集技术 | 第13-18页 |
| 1.2.1 样品堆积技术 | 第13-16页 |
| 1.2.2 样品扫集技术 | 第16页 |
| 1.2.3 毛细管等速电泳技术 | 第16-17页 |
| 1.2.4 毛细管等电聚焦 | 第17-18页 |
| 1.2.5 在线固相富集技术 | 第18页 |
| 1.3 蛋白质翻译后修饰 | 第18-25页 |
| 1.3.1 蛋白磷酸化修饰 | 第19-20页 |
| 1.3.2 蛋白激酶活性检测及其抑制剂筛选 | 第20页 |
| 1.3.3 基于比色法检测激酶活性 | 第20-22页 |
| 1.3.4 基于荧光方法检测激酶活性 | 第22-23页 |
| 1.3.5 基于电化学检测激酶活性 | 第23-24页 |
| 1.3.6 基于毛细管电泳技术检测激酶活性 | 第24-25页 |
| 1.4 本文构思 | 第25-27页 |
| 第2章 非连续电解质毛细管等速电泳在线富集磷酸化多肽间接检测激酶活性 | 第27-35页 |
| 2.1 前言 | 第27-28页 |
| 2.2 实验部分 | 第28-29页 |
| 2.2.1 试剂与材料 | 第28-29页 |
| 2.2.2 仪器 | 第29页 |
| 2.2.3 CITP分析PKA催化的多肽底物和产物 | 第29页 |
| 2.2.4 PKA激酶催化多肽磷酸化 | 第29页 |
| 2.2.5 CITP检测PKA激酶活性 | 第29页 |
| 2.3 结果和讨论 | 第29-34页 |
| 2.3.1 CITP分析PKA多肽 | 第29-30页 |
| 2.3.2 CITP条件优化 | 第30-33页 |
| 2.3.2.1 前导电解质体系中离子种类的优化 | 第30-31页 |
| 2.3.2.2 前导电解质浓度的优化 | 第31-32页 |
| 2.3.2.3 进样时间条件优化 | 第32页 |
| 2.3.2.4 分离电压条件优化 | 第32-33页 |
| 2.3.3 不同电泳方法检测PKA多肽的比较 | 第33页 |
| 2.3.4 激酶工作曲线的建立 | 第33-34页 |
| 2.4 小结 | 第34-35页 |
| 第3章 毛细管等电聚焦在线高灵敏度检测PKA激酶活性 | 第35-43页 |
| 3.1 前言 | 第35-36页 |
| 3.2 实验试剂、材料与仪器 | 第36-37页 |
| 3.2.1 实验试剂、材料 | 第36页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第36页 |
| 3.2.3 毛细管等电聚焦用的中性毛细管的制备 | 第36-37页 |
| 3.2.4 毛细管等电聚焦在线分析PKA催化的多肽底物和产物 | 第37页 |
| 3.2.5 PKA激酶催化多肽磷酸化 | 第37页 |
| 3.2.6 毛细管等电聚焦检测PKA激酶活性 | 第37页 |
| 3.3 结果和讨论 | 第37-42页 |
| 3.3.1 On-line CIEF分析PKA多肽 | 第37-38页 |
| 3.3.2 条件优化 | 第38-40页 |
| 3.3.3 不同电泳方法检测PKA多肽 | 第40-41页 |
| 3.3.4 激酶工作曲线的建立 | 第41-42页 |
| 3.4 小结 | 第42-43页 |
| 第4章 在线等电聚焦同时分析多种激酶及其抑制剂筛选并高灵敏度检测细胞裂解液中的激酶活性 | 第43-53页 |
| 4.1 前言 | 第43-44页 |
| 4.2 实验部分 | 第44-46页 |
| 4.2.1 试剂和材料 | 第44-45页 |
| 4.2.2 实验仪器设备 | 第45页 |
| 4.2.3 毛细管在线等电聚焦结合激光诱导荧光检测分析 | 第45页 |
| 4.2.4 同时检测激酶活性和激酶抑制剂筛选 | 第45页 |
| 4.2.5 细胞裂解液中细胞激酶活性分析 | 第45-46页 |
| 4.3 结果和讨论 | 第46-51页 |
| 4.3.1 在线等电聚焦富集分析双重激酶催化多肽混合物 | 第46-47页 |
| 4.3.2 双重激酶活性检测 | 第47-48页 |
| 4.3.3 激酶抑制剂活性分析 | 第48-50页 |
| 4.3.4 癌细胞裂解液中蛋白激酶活性检测 | 第50-51页 |
| 4.4 本章小结 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
