精氨酸甲基转移酶PRMT7对干性转录因子的调控及对胚胎干细胞干性维持的影响
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-27页 |
| ·表观遗传学概述 | 第11-12页 |
| ·组蛋白修饰 | 第12-13页 |
| ·蛋白质甲基化修饰 | 第13-16页 |
| ·胚胎干细胞 | 第16-18页 |
| ·精氨酸甲基化 | 第18-24页 |
| ·精氨酸甲基化酶PRMT7研究现状 | 第24-26页 |
| ·总结 | 第26-27页 |
| 第二章 实验材料 | 第27-37页 |
| ·质粒信息 | 第27页 |
| ·抗体信息 | 第27页 |
| ·引物序列信息 | 第27-29页 |
| ·qRT-PCR引物序列 | 第28页 |
| ·shRNA和siRNA序列 | 第28-29页 |
| ·细胞系及相关培养基配制 | 第29页 |
| ·细菌及培养基配制 | 第29-30页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳缓冲液配制 | 第30-31页 |
| ·蛋白提取相关试剂配制 | 第31-32页 |
| ·SDS-PAGE凝胶及其电泳缓冲液配制 | 第32-34页 |
| ·甲基化反应放射自显影溶液配制 | 第34-35页 |
| ·其他实验试剂 | 第35-36页 |
| ·实验仪器 | 第36-37页 |
| 第三章 实验方法 | 第37-49页 |
| ·碱性磷酸酶染色 | 第37页 |
| ·免疫染色 | 第37-38页 |
| ·免疫共沉淀 | 第38-39页 |
| ·蛋白质免疫印迹 | 第39页 |
| ·RNA抽提、反转及实时荧光定量PCR | 第39-41页 |
| ·原核系统中GST融合蛋白的表达、纯化 | 第41-42页 |
| ·体外甲基化实验 | 第42-43页 |
| ·细胞实验 | 第43-45页 |
| ·荧光素酶报告系统 | 第45页 |
| ·克隆构建 | 第45-49页 |
| 第四章 实验结果 | 第49-67页 |
| ·检测细胞内源PRMT7表达 | 第49-50页 |
| ·诱导分化实验 | 第50-52页 |
| ·内源PRMT7敲除实验 | 第52-55页 |
| ·PRMT7敲除对胚胎干细胞的影响 | 第52-53页 |
| ·PRMT7敲除对干性因子的影响 | 第53-55页 |
| ·PRMT7与干性因子之间相互作用检测 | 第55-57页 |
| ·PRMT7对干性因子的调控作用 | 第57-64页 |
| ·PRMT7对干性因子转录活性调控 | 第57-60页 |
| ·PRMT7对干性因子蛋白水平调控 | 第60-64页 |
| ·体外甲基化实验 | 第64-67页 |
| 第五章 总结与展望 | 第67-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
