| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-17页 |
| 1 丙型肝炎病毒研究现状 | 第9-12页 |
| 2 干扰素刺激基因16 | 第12-13页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第13-14页 |
| 4 本研究的技术路线 | 第14-17页 |
| 实验材料 | 第17-26页 |
| 1 主要实验仪器及耗材 | 第17-18页 |
| 2 常用工具酶和试剂 | 第18-19页 |
| 3 菌株及培养基 | 第19页 |
| 4 细胞及培养基 | 第19-20页 |
| 5 转染质粒及载体 | 第20-22页 |
| 6 Realtime PCR引物 | 第22页 |
| 7 常用试剂配制方法 | 第22-24页 |
| 8 主要试剂及来源用途 | 第24-26页 |
| 实验方法 | 第26-44页 |
| 第一部分 ISG16基因的克隆和表达载体的构建 | 第26-33页 |
| 1 ISG16基因目的片段的获得 | 第26-29页 |
| 2 目的片段与测序载体连接验证片段正确性 | 第29-31页 |
| 3 目的片段与表达载体连接 | 第31-33页 |
| 第二部分 重组质粒pcDNA3.1-3×tag-ISG16的真核表达验证 | 第33-40页 |
| 1 重组质粒pcDNA3.1-3×tag-ISG16大量提取 | 第33-34页 |
| 2 细胞株复苏和培养以及转染体系建立 | 第34-36页 |
| 3 重组质粒pcDNA3.1-3×tag-ISG16的真核表达验证 | 第36-40页 |
| 第三部分 重组质粒pcDNA3.1-3×tag-ISG16对丙型肝炎病毒以及干扰素信号通路的影响 | 第40-42页 |
| 1 ISG16对丙型肝炎病毒复制以及IFN-α抗病毒作用的影响 | 第40-41页 |
| 2 ISG16对干扰素信号通路的影响 | 第41-42页 |
| 第四部分 ISG16在丙型肝炎病人外周血单核细胞PBMCs中的表达 | 第42-44页 |
| 1 丙型肝炎病人外周血标本采集 | 第42页 |
| 2 PBMCs的分离 | 第42-43页 |
| 3 PBMCs培养和处理 | 第43页 |
| 4 总RNA提取和Realtime-PCR检测 | 第43-44页 |
| 实验结果 | 第44-52页 |
| 1 pcDNA3.1-3×tag-ISG16质粒构建 | 第44-46页 |
| 2 pcDNA3.1-3×tag-ISG16在肝癌细胞系中的高表达 | 第46-47页 |
| 3 ISG16对HCV复制以及IFN-α抗病毒作用的影响 | 第47-48页 |
| 4 ISG16对Ⅰ型干扰素信号通路的影响 | 第48-51页 |
| 5 ISG16在慢性丙型肝炎患者PBMCs中的表达水平与干扰素治疗疗效的相关性研究 | 第51-52页 |
| 讨论 | 第52-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 附录 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 文献综述 | 第62-73页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 个人简历 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
