| 目录 | 第1-8页 |
| Contents | 第8-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-35页 |
| ·青枯菌概述 | 第15-19页 |
| ·青枯菌 | 第15-16页 |
| ·青枯病 | 第16-19页 |
| ·青枯菌分类与症状 | 第17-19页 |
| ·青枯菌 Po82 菌株 | 第19页 |
| ·青枯菌的非可培养活细胞状（ViableButNotCulturable,VBNC） | 第19-22页 |
| ·青枯菌检测 | 第22-28页 |
| ·指示植物检测 | 第22页 |
| ·平板划线分离法 | 第22-23页 |
| ·血清学 | 第23-24页 |
| ·酶联免疫吸附法 | 第23页 |
| ·间接免疫荧光染色 | 第23页 |
| ·单克隆抗体 | 第23页 |
| ·免疫试纸条(Immuno-strip) | 第23-24页 |
| ·分子检测 | 第24-28页 |
| ·分子杂交检测法 | 第24页 |
| ·PCR 扩增技术 | 第24-28页 |
| ·脂肪酸甲酯分析（FAME） | 第28页 |
| ·叠氮溴化丙锭（PMA） | 第28-29页 |
| ·荧光实时定量 PCR | 第29-33页 |
| ·荧光实时定量 PCR 的原理 | 第29-30页 |
| ·探针技术的发展 | 第30-31页 |
| ·探针设计原则 | 第31页 |
| ·荧光实时定量 PCR 技术在植物病原菌检测的应用 | 第31-33页 |
| ·研究的目的和技术路线 | 第33-35页 |
| ·研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| ·技术路线 | 第34-35页 |
| 第二章 土壤中青枯菌群体的动态消涨规律研究 | 第35-52页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·供试菌株 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35-36页 |
| ·试剂和耗材 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-41页 |
| ·供试青枯菌接种体的准备 | 第36页 |
| ·青枯病带菌土样的制备 | 第36-38页 |
| ·带菌土样的检测方法 | 第38-41页 |
| ·平板划线分离 | 第38页 |
| ·免疫试纸条检测方法 | 第38-39页 |
| ·土壤 DNA 的分子检测 | 第39-40页 |
| ·DNA 样品的分子检测方法 | 第40页 |
| ·BIO-PCR 检测 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-49页 |
| ·平板划线分离结果 | 第41-43页 |
| ·试纸条检测结果 | 第43页 |
| ·土壤 DNA 样品的分子检测 | 第43-44页 |
| ·BIO-PCR 检测结果 | 第44-48页 |
| ·青枯菌在土壤中种群动态消涨规律 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 VBNC 状态青枯菌的检测 | 第52-62页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·供试菌株 | 第52-53页 |
| ·主要仪器设备 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-56页 |
| ·青枯菌死菌悬液的制备 | 第53-54页 |
| ·青枯菌 hrcS 基因序列的获取 | 第54-55页 |
| ·靶标青枯菌基因组 DNA 提取 | 第54-55页 |
| ·PCR 引物设计 | 第55页 |
| ·PCR 扩增条件 | 第55页 |
| ·PCR 特异性试验 | 第55页 |
| ·引物扩增灵敏度 | 第55页 |
| ·样品的 PMA 处理方法 | 第55页 |
| ·青枯菌 VBNC 状态的诱导 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-60页 |
| ·特异性引物设计 | 第56页 |
| ·PCR 条件的确立 | 第56-57页 |
| ·PCR 特异性与灵敏度验证 | 第57-58页 |
| ·特异性试验 | 第57页 |
| ·灵敏度试验 | 第57-58页 |
| ·高温胁迫诱导青枯菌进入 VBNC 状态 | 第58页 |
| ·处于 VBNC 状态的青枯菌的 PMA-PCR 方法检测 | 第58-59页 |
| ·PMA-PCR 检测方法的假阳性验证 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 荧光实时 PCR 探针的设计 | 第62-74页 |
| ·材料 | 第62-63页 |
| ·供试菌株 | 第62-63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·试剂和耗材 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-66页 |
| ·pGM-T 克隆测序 | 第63-65页 |
| ·荧光实时定量 PCR | 第65-66页 |
| ·引物和 TapMan 探针的设计与合成 | 第65页 |
| ·荧光定量 PCR 反应体系的组成 | 第65页 |
| ·荧光定量 PCR 反应体系的优化 | 第65-66页 |
| ·荧光定量 PCR 反应标准曲线的制作 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-73页 |
| ·测序结果 | 第66-72页 |
| ·探针的实际应用 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-74页 |
| 第五章 全文结论 | 第74-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 攻读学位期间发表的论文及著作 | 第84页 |
