中文摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-12页 |
常用英文缩写表 | 第12-20页 |
第一部分 文献综述 | 第20-35页 |
第一章 抗疱疹病毒类药物概述 | 第20-27页 |
1 化学治疗药物及其作用机制 | 第20-22页 |
·化学治疗药物 | 第20页 |
·作用机制 | 第20-22页 |
·核苷类似物作用机制 | 第20-22页 |
·酞甲酸钠作用机制 | 第22页 |
·酞丁安作用机制 | 第22页 |
·n-22烷醇作用机制 | 第22页 |
2 中药及其活性成分 | 第22-27页 |
·中药粗提物 | 第23页 |
·中药有效成分 | 第23-27页 |
·白藜芦醇 | 第24页 |
·鬼臼毒素 | 第24-25页 |
·大蒜新素 | 第25页 |
·芒果苷 | 第25-27页 |
第二章 白藜芦醇抗病毒研究进展 | 第27-32页 |
1 抗疱疹病毒研究 | 第27-30页 |
·抗HSV-1和HSV-2研究 | 第27-28页 |
·抗VZV病毒研究 | 第28-29页 |
·抗HCMV病毒研究 | 第29页 |
·抗EBV病毒研究 | 第29-30页 |
2 抗RNA病毒 | 第30-31页 |
·抗HIV病毒研究 | 第30页 |
·抗IFV病毒 | 第30-31页 |
·抗SARS病毒研究 | 第31页 |
·抗HTLV病毒研究 | 第31页 |
3 抗其它病毒研究 | 第31-32页 |
·抗非洲猪瘟病毒研究 | 第31页 |
·抗71型肠道病毒研究 | 第31-32页 |
第三章 研究背景和目的 | 第32-35页 |
1 研究背景 | 第32-33页 |
2 研究目的 | 第33-35页 |
·对鸭瘟的防治 | 第33页 |
·对疱疹病毒新靶点的发现 | 第33-35页 |
第二部分 实验研究 | 第35-135页 |
第四章 体外抗DPV活性物质筛选 | 第35-57页 |
1 实验材料 | 第35-36页 |
·实验药材 | 第35页 |
·试剂及培养基 | 第35-36页 |
·细胞及毒株 | 第36页 |
·主要仪器设备 | 第36页 |
2 实验方法 | 第36-41页 |
·细胞培养相关试剂的配制 | 第36-37页 |
·鸭胚成纤维细胞的制备 | 第37页 |
·病毒增殖 | 第37页 |
·病毒半数组织培养感染量的测定 | 第37-38页 |
·DMSO对DEFs体外生长的影响 | 第38页 |
·中药粗提物抗DPV活性检测 | 第38-39页 |
·粗提物的提取 | 第38页 |
·各中药粗提物对DEFs的毒性检测 | 第38-39页 |
·各中药粗提物对DPV的体外抑制效果检测 | 第39页 |
·MTT法检测中药粗提物对DPV的体外抑制作用 | 第39页 |
·印楝种仁粗提物萃取各段抗DPV活性检测 | 第39-40页 |
·萃取物的制备 | 第39页 |
·印楝种仁三种萃取物对DEFs的毒性实验 | 第39-40页 |
·印楝种仁三种萃取物对DPV的体外抑制作用 | 第40页 |
·油樟挥发油及其主要活性成分抗DPV活性检测 | 第40-41页 |
·供试药物的制备 | 第40页 |
·油樟挥发油及其主要活性成分对DEFs的毒性实验 | 第40页 |
·油樟挥发油及其主要活性成分对DPV的体外抑制作用 | 第40-41页 |
3 实验结果 | 第41-53页 |
·病毒TCID_(50)测定结果 | 第41页 |
·DMSO对DEFs及DPV的作用 | 第41-42页 |
·中药粗提物抗DPV检测结果 | 第42-50页 |
·中药粗提物对DEFs的毒性试验 | 第42页 |
·中药粗提物对DPV的体外抑制作用 | 第42-49页 |
·MTT法检测虎杖、茜草醇提物对DPV的体外抑制作用 | 第49-50页 |
·印楝抗DPV检测结果 | 第50页 |
·印楝种仁三种萃取物对DEFs的毒性实验 | 第50页 |
·印楝种仁三种萃取物对DPV的抑制作用 | 第50页 |
·油樟挥发油及其主要活性成分抗DPV检测结果 | 第50-53页 |
·油樟挥发油及其主要活性成分对DEFs的毒性实验结果 | 第50-51页 |
·油樟挥发油及其主要活性成分对DPV的抑制作用 | 第51-53页 |
4 分析与讨论 | 第53-56页 |
·DMSO作为供试品溶媒在抗病毒活性研究中的使用 | 第53页 |
·具有抗DPV活性的中药的筛选 | 第53-54页 |
·印楝种仁提取物抗DPV活性 | 第54-55页 |
·油樟挥发油及其主要活性成分抗DPV活性 | 第55-56页 |
5 小结 | 第56-57页 |
第五章 白藜芦醇体外抗DPV活性研究 | 第57-68页 |
1 实验材料 | 第57-58页 |
·实验药材 | 第57页 |
·试剂及培养基 | 第57页 |
·细胞及毒株 | 第57页 |
·主要仪器设备 | 第57-58页 |
2 实验方法 | 第58-59页 |
·供试药物的制备 | 第58页 |
·白藜芦醇对DEFs的毒性实验 | 第58页 |
·白藜芦醇对DPV的抑制作用 | 第58-59页 |
·白藜芦醇对DPV的半数有效浓度(IC_(50)) | 第58-59页 |
·评价方法 | 第59页 |
·白藜芦醇对DPV滴度的影响 | 第59页 |
·不同浓度白藜芦醇作用后DPV病毒液的收集 | 第59页 |
·毒液滴度(TCID_(50))的测定 | 第59页 |
3 实验结果 | 第59-63页 |
·白藜芦醇对DEFs的毒性检测结果 | 第59-61页 |
·白藜芦醇对DPV的抑制作用结果 | 第61-63页 |
·白藜芦醇作用下染毒细胞病变情况观察 | 第61页 |
·白藜芦醇对DPV的IC_(50) | 第61-63页 |
·白藜芦醇对DPV的治疗指数评价 | 第63页 |
·白藜芦醇对DPV滴度的影响结果 | 第63页 |
4 分析和讨论 | 第63-67页 |
·白藜芦醇的抗病毒活性及评价方法 | 第63-66页 |
·白藜芦醇对DPV滴度的影响 | 第66-67页 |
5 小结 | 第67-68页 |
第六章 TaqMan绝对荧光定量方法的建立和白藜芦醇对DPV体外复制的影响 | 第68-80页 |
1 实验材料 | 第68-69页 |
·主要试剂 | 第68页 |
·主要仪器设备 | 第68-69页 |
·毒株 | 第69页 |
·引物和探针 | 第69页 |
2 实验方法 | 第69-72页 |
·FQ-PCR方法的建立 | 第69-71页 |
·基因组的提取 | 第69页 |
·普通PCR反应体系 | 第69-70页 |
·标准阳性模板的制备 | 第70页 |
·标准曲线的制备 | 第70-71页 |
·灵敏性、特异性及重复性检测 | 第71页 |
·白藜芦醇对DPV在DEFs中生长曲线的影响 | 第71-72页 |
·白藜芦醇作用下不同时间点DEFs中DPV基因组的提取 | 第71-72页 |
·FQ-PCR测定不同时间点DEFs中DPV的含量 | 第72页 |
3 实验结果 | 第72-77页 |
·FQ-PCR方法的建立 | 第72-74页 |
·UL30基因的扩增、克隆及鉴定结果 | 第72-73页 |
·标准曲线的建立 | 第73页 |
·实时荧光定量PCR的敏感性、特异性及重复性试验结果 | 第73-74页 |
·白藜芦醇对DPV在DEFs中生长曲线的影响结果 | 第74-77页 |
4 分析和讨论 | 第77-79页 |
·TaqMan FQ-PCR方法 | 第77-78页 |
·白藜芦醇对DPV体外生长曲线的影响 | 第78-79页 |
5 小结 | 第79-80页 |
第七章 白藜芦醇体外抗DPV作用特征的研究 | 第80-91页 |
1 实验方法 | 第80页 |
·实验药材 | 第80页 |
·试剂及培养基 | 第80页 |
·细胞及毒株 | 第80页 |
·主要仪器设备 | 第80页 |
2 实验方法 | 第80-83页 |
·供试药物的制备 | 第80-81页 |
·白藜芦醇对DPV不同作用阶段的作用研究 | 第81-82页 |
·白藜芦醇对DPV直接杀灭作用的研究 | 第81页 |
·白藜芦醇对DEFs的保护作用 | 第81页 |
·白藜芦醇对DPV穿入阶段作用的研究 | 第81页 |
·白藜芦醇对DPV胞内繁殖阶段作用的研究 | 第81页 |
·检测方法 | 第81-82页 |
·不同给药时间下白藜芦醇对DPV毒力的影响 | 第82页 |
·样品的制备 | 第82页 |
·检测方法 | 第82页 |
·透射电镜检测白藜芦醇作用下DPV在DEFs中的复制情况 | 第82-83页 |
·样品的制备 | 第82页 |
·检测方法 | 第82-83页 |
3 实验结果 | 第83-87页 |
·白藜芦醇对DPV不同作用阶段研究结果 | 第83-84页 |
·不同给药时间下白藜芦醇对DPV毒力的影响结果 | 第84页 |
·透射电镜检测结果 | 第84-87页 |
4 分析和讨论 | 第87-90页 |
·白藜芦醇对DPV不同作用阶段的研究 | 第87-88页 |
·白藜芦醇抑制DPV主要作用时间段 | 第88-89页 |
·白藜芦醇作用下感染了DPV的DEFs超微结构观察 | 第89-90页 |
5 小结 | 第90-91页 |
第八章 白藜芦醇对DPV立即早期和早期基因转录的抑制作用研究 | 第91-111页 |
1 实验材料 | 第91页 |
·实验药材 | 第91页 |
·试剂及培养基 | 第91页 |
·细胞及毒株 | 第91页 |
·主要仪器设备 | 第91页 |
2 实验方法 | 第91-95页 |
·供试药物的制备 | 第91-92页 |
·引物设计 | 第92页 |
·总RNA的提取及反转录 | 第92-93页 |
·PCR产物回收纯化 | 第93-94页 |
·退火温度的筛选 | 第94-95页 |
·标准曲线及扩增效率的检测 | 第95页 |
·白藜芦醇对DPV立即早期和早期基因转录抑制情况的检测.. | 第95页 |
3 实验结果 | 第95-107页 |
·RNA完整性及纯度分析 | 第95-96页 |
·引物特异性检测 | 第96页 |
·退火温度 | 第96-99页 |
·标准曲线及扩增效率 | 第99-105页 |
·白藜芦醇抑制DPV早期基因转录的检测结果 | 第105-107页 |
4 分析与讨论 | 第107-109页 |
·反转录FQ-PCR方法的应用 | 第107-108页 |
·白藜芦醇对DPV早期基因转录的抑制 | 第108-109页 |
5 小结 | 第109-111页 |
第九章 白藜芦醇体内抗DPV活性及对相关细胞因子调节作用研究 | 第111-134页 |
1 实验材料 | 第111页 |
·主要试剂 | 第111页 |
·主要仪器设备 | 第111页 |
·毒株与实验动物 | 第111页 |
·实验药品 | 第111页 |
2 实验方法 | 第111-114页 |
·实验药品的配制 | 第111-112页 |
·DPV鸭胚半数致死浓度的检测 | 第112页 |
·动物分组及给药 | 第112-113页 |
·病理学观察 | 第113页 |
·临床、剖检观察 | 第113页 |
·组织病理学观察 | 第113页 |
·TEM观察 | 第113页 |
·各实验组外周血载毒量的检测 | 第113-114页 |
·盐酸胍法全血DNA提取 | 第113-114页 |
·Taq Man探针FQ-PCR法检测血液中DPV拷贝数 | 第114页 |
·细胞因子检测 | 第114页 |
3 实验结果 | 第114-127页 |
·DPV ELD_(50)检测结果 | 第114页 |
·临床症状观察 | 第114-116页 |
·死亡率统计 | 第116-117页 |
·组织病理学检测 | 第117页 |
·TEM检测结果 | 第117-118页 |
·用药期间外周静脉血液中载毒量检测结果 | 第118-119页 |
·细胞因子检测结果 | 第119-127页 |
·IFN-α水平变化情况 | 第119-121页 |
·IFN-γ水平变化情况 | 第121-123页 |
·IL-2水平变化情况 | 第123-124页 |
·IL-4水平变化情况 | 第124-126页 |
·IL-12水平变化情况 | 第126-127页 |
4 分析和讨论 | 第127-133页 |
·体内实验药物的配制及给药方式 | 第127-128页 |
·临床鸭瘟病理模型的建立 | 第128-129页 |
·白藜芦醇对鸭瘟的临床治疗效果 | 第129页 |
·白藜芦醇对DPV在鸭体内复制的抑制作用 | 第129-130页 |
·白藜芦醇对细胞因子的影响与治疗作用的关系 | 第130-133页 |
5 结论 | 第133-134页 |
第十章 结论与创新 | 第134-135页 |
1 结论 | 第134页 |
2 创新性 | 第134-135页 |
参考文献 | 第135-151页 |
致谢 | 第151-152页 |
附图 | 第152-164页 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第164页 |