| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表及其英汉对照 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1 黄瓜苦味研究进展 | 第13-18页 |
| ·黄瓜苦味及其产生原因 | 第13-14页 |
| ·萜类物质的生物合成 | 第14-16页 |
| ·参与黄瓜苦味合成的基因簇 | 第16页 |
| ·黄瓜中葫芦素C的检测方法 | 第16-17页 |
| ·黄瓜苦味遗传及分子生物学研究 | 第17-18页 |
| 2 植物基因克隆的方法 | 第18-20页 |
| ·图位克隆 | 第18页 |
| ·功能克隆 | 第18-19页 |
| ·转座子标签法 | 第19页 |
| ·同源克隆 | 第19页 |
| ·mRNA差异显示技术 | 第19-20页 |
| ·鸟枪克隆法 | 第20页 |
| 3 植物遗传转化的研究方法 | 第20-24页 |
| ·农杆菌介导法 | 第20-23页 |
| ·脂质体转化法 | 第23页 |
| ·基因枪法 | 第23页 |
| ·电击法 | 第23-24页 |
| ·超声波法 | 第24页 |
| ·化学药剂诱导法 | 第24页 |
| 4 科学意义及应用前景 | 第24-27页 |
| 第二章 BI基因的克隆 | 第27-33页 |
| 1 材料 | 第27页 |
| 2 生化试剂 | 第27页 |
| 3 方法 | 第27-29页 |
| ·系统发育分析 | 第27页 |
| ·Csa680氨基酸序列同源性比对 | 第27-28页 |
| ·Csa680基因的差异表达分析 | 第28-29页 |
| ·黄瓜各组织中葫芦素C的检测 | 第29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-31页 |
| ·系统发育分析 | 第29-30页 |
| ·Csa680氨基酸序列同源性比对 | 第30页 |
| ·Csa680基因在各组织中差异表达分析 | 第30-31页 |
| ·黄瓜组织中葫芦素C含量的检测 | 第31页 |
| 5 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 利用酵母表达系统研究CSA680基因的功能 | 第33-43页 |
| 1 材料 | 第34页 |
| ·菌株与载体 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·生化试剂 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-37页 |
| ·总RNA的提取 | 第34页 |
| ·总RNA定量与完整性检测 | 第34-35页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第35页 |
| ·Csa680基因的获得 | 第35页 |
| ·酵母表达载体pYES2-Csa680的构建 | 第35-37页 |
| ·酵母转化 | 第37页 |
| ·Western blot检测Csa680蛋白 | 第37页 |
| ·酵母次生代谢产物的提取及GC-MS检测 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-40页 |
| ·pYES2-Csa680酵母表达载体的构建 | 第37-39页 |
| ·酵母转化 | 第39页 |
| ·Western Blot检测Csa680蛋白 | 第39-40页 |
| ·Csa680基因诱导表达及产物GC-MS检测 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| 第四章 利用烟草瞬时表达系统研究CSA680基因的功能 | 第43-51页 |
| 1 材料 | 第43-44页 |
| ·菌株与载体 | 第43-44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·生化试剂 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-47页 |
| ·Csa680过表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第45页 |
| ·农杆菌的转化 | 第45页 |
| ·烟草瞬时表达 | 第45-46页 |
| ·Csa680基因的差异表达分析 | 第46-47页 |
| ·从烟草中提取Csa680蛋白的反应产物及GC-MS检测 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-49页 |
| ·pCMBIA1300-Csa680表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·pCAMBIA1300-Csa680的农杆菌转化 | 第48页 |
| ·烟草植株中Csa680 mRNA的表达分析 | 第48-49页 |
| ·烟草中Csa680蛋白反应产物的GC-MS检测 | 第49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 CSA680转基因表型恢复功能验证 | 第51-61页 |
| 1 材料 | 第51页 |
| ·植物材料 | 第51页 |
| ·培养基 | 第51页 |
| ·生化试剂 | 第51页 |
| 2 方法 | 第51-56页 |
| ·农杆菌转化 | 第51-52页 |
| ·农杆菌菌液的制备 | 第52页 |
| ·Csa680遗传转化 | 第52-53页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第53-54页 |
| ·Csa680基因的差异表达分析 | 第54-55页 |
| ·转基因材料的dCAPS鉴定 | 第55页 |
| ·转基因材料中葫芦素C的LC-MS检测 | 第55-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-59页 |
| ·pCAMBIA1300-Csa680的农杆菌转化 | 第56页 |
| ·转Csa680基因黄瓜植株的获得及分子鉴定 | 第56-58页 |
| ·转基因黄瓜材料中葫芦素C的LC-MS检测 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 全文结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录 | 第69-77页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
