| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 引言 | 第15-41页 |
| 1. 癫痫 | 第15-28页 |
| ·癫痫 | 第15-16页 |
| ·婴幼儿严重肌阵挛性癫痫(SMEI) | 第16-28页 |
| ·婴幼儿严重肌阵挛性癫痫(SMEI)及其临床诊断 | 第16-17页 |
| ·婴幼儿严重肌阵挛性癫痫(SMEI)的治疗 | 第17-18页 |
| ·引起婴幼儿严重肌阵挛性癫痫(SMEI)的基因病变 | 第18-22页 |
| ·婴幼儿严重肌阵挛性癫痫(SMEI)的致病机制 | 第22-28页 |
| ·突变造成钠离子通道电流减小 | 第22-26页 |
| ·突变造成钠离子通道表达量的变化 | 第26-28页 |
| 2. 人诱导多能干细胞(hiPS) | 第28-37页 |
| ·人诱导多能干细胞(hiPS)的起源与诞生 | 第28-29页 |
| ·人诱导多能干细胞(hiPS)的技术革新 | 第29-31页 |
| ·人诱导多能干细胞(hiPS)的疾病模型 | 第31-33页 |
| ·利用人诱导多能干细胞建立疾病细胞模型的注意问题 | 第33-34页 |
| ·人诱导多能干细胞(hiPS)与神经退行性疾病 | 第34-35页 |
| ·细胞替代治疗 | 第35-37页 |
| 3. 基因工程 | 第37-41页 |
| ·锌指核酸酶(ZFNs) | 第38页 |
| ·类转录激活因子核酸酶(TALEN) | 第38-41页 |
| 材料与方法 | 第41-67页 |
| 1. 材料 | 第41-46页 |
| ·细胞株 | 第41页 |
| ·菌株,质粒和动物 | 第41页 |
| ·常用试剂盒 | 第41-42页 |
| ·常用抗体、工具酶和化学试剂 | 第42-44页 |
| ·主要实验仪器和器材 | 第44页 |
| ·实验所用引物 | 第44-46页 |
| 2. 实验方法 | 第46-67页 |
| ·病人来源iPS细胞的获得 | 第46-49页 |
| ·iPS细胞诱导 | 第46-48页 |
| ·iPS细胞鉴定 | 第48-49页 |
| ·病人来源的iPS/正常人来源的iPS的基因打靶 | 第49-57页 |
| ·iPS细胞的培养,传代,冻存 | 第49页 |
| ·Donor,TALEN质粒的构建 | 第49-53页 |
| ·Donor质粒构建 | 第49-53页 |
| ·TALEN质粒构建 | 第53页 |
| ·TALEN切割效率 | 第53-55页 |
| ·利用TALEN技术引入突变 | 第55页 |
| ·突变鉴定 | 第55-56页 |
| ·药筛基因(Neo)的切除 | 第56-57页 |
| ·基因打靶后多能性鉴定 | 第57页 |
| ·免疫荧光 | 第57页 |
| ·畸胎瘤 | 第57页 |
| ·疾病修复的细胞株(AN)/人造病人的细胞株(AP)神经元获得 | 第57-60页 |
| ·神经元分化 | 第57-58页 |
| ·神经元鉴定 | 第58-60页 |
| ·免疫荧光 | 第58-59页 |
| ·电生理鉴定 | 第59页 |
| ·RT-PCR | 第59-60页 |
| ·TALEN脱靶研究 | 第60-61页 |
| ·Southern Blot | 第61-67页 |
| ·探针制作 | 第61-63页 |
| ·基因组DNA制备 | 第63页 |
| ·基因组DNA的限制性酶切 | 第63页 |
| ·基因组DNA消化产物的乙醇沉淀浓缩 | 第63-64页 |
| ·基因组DNA消化产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第64页 |
| ·DNA从琼脂糖凝胶转移到固相支持物 | 第64-65页 |
| ·杂交 | 第65-66页 |
| ·洗膜与检测 | 第66-67页 |
| 结果 | 第67-82页 |
| 1、实验概述 | 第67-68页 |
| 2、病人来源的细胞重编程为iPS细胞及鉴定 | 第68-71页 |
| 3、Donor和TANLEN质粒构造 | 第71-72页 |
| 4、利用TALEN的基因操作 | 第72-75页 |
| 5、基因操作后NoriPS细胞(AP)的多能性鉴定 | 第75-77页 |
| 6、iPS细胞向神经元分化 | 第77-79页 |
| 7、iPS细胞分化来源的神经元电生理研究 | 第79-82页 |
| 讨论 | 第82-85页 |
| 参考文献 | 第85-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 附录 | 第95-99页 |
| 硕士期间发表论文 | 第99页 |
