| 缩略词表 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1、文献综述 | 第15-24页 |
| ·核仁简介 | 第15-16页 |
| ·有丝分裂过程中核仁的变化 | 第16-17页 |
| ·减数分裂过程中的核仁变化 | 第17-18页 |
| ·卵母细胞生长和成熟过程中的核仁变化 | 第17页 |
| ·减数分裂过程中的核仁变化 | 第17-18页 |
| ·早期胚胎发育过程中的核仁重建 | 第18-19页 |
| ·受精后核仁组分的分布动态变化 | 第18页 |
| ·早期胚胎功能核仁的重建 | 第18-19页 |
| ·核仁发生过程中一些母源物质被重新利用 | 第19页 |
| ·体外产生胚胎的核仁发生存在异常 | 第19-20页 |
| ·核移植胚胎的核仁发生存在异常 | 第20-21页 |
| ·核移植胚胎核仁发生异常的原因分析和对后续发育影响 | 第21-22页 |
| ·小结和展望 | 第22-24页 |
| 2、前言 | 第24-25页 |
| 3、材料与方法 | 第25-48页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·实验动物 | 第25页 |
| ·实验试剂 | 第25页 |
| ·供体细胞的建株和培养 | 第25-26页 |
| ·B6D2F1 小鼠 MEFs 的建株和培养 | 第25-26页 |
| ·B6D2F1 小鼠 ESCs 的建株和培养 | 第26页 |
| ·颗粒细胞的培养 | 第26页 |
| ·MII 期卵母细胞和精子的收集和准备 | 第26-27页 |
| ·卵母细胞的收集和准备 | 第26-27页 |
| ·精子的收集和准备 | 第27页 |
| ·ICSI 胚胎的构建和培养 | 第27-29页 |
| ·ICSI 操作仪器和试剂的准备 | 第27页 |
| ·ICSI 的操作过程 | 第27-28页 |
| ·胚胎培养 | 第28-29页 |
| ·核移植胚胎的构建、激活和培养 | 第29-32页 |
| ·核移植供体细胞的准备 | 第29页 |
| ·核移植操作仪器和试剂的准备 | 第29页 |
| ·两步法核移植操作过程 | 第29-31页 |
| ·一步法核移植操作过程 | 第31-32页 |
| ·核移植胚胎的激活和培养 | 第32页 |
| ·透射电镜观察核仁的超微结构 | 第32-34页 |
| ·透射电镜样品的制备 | 第32-33页 |
| ·半薄切片和筛选 | 第33页 |
| ·重包埋和回收 | 第33-34页 |
| ·超薄切片和电镜观察 | 第34页 |
| ·放线菌素 D 处理颗粒细胞 | 第34-35页 |
| ·供体细胞核型分析和活性 NORs 染色 | 第35-37页 |
| ·细胞中期染色体片的制作 | 第35-36页 |
| ·供体细胞核型分析 | 第36页 |
| ·供体细胞中期染色体制片的活性 NOR 染色 | 第36-37页 |
| ·供体细胞免疫荧光观察核仁蛋白 B23、UBF 的分布 | 第37-38页 |
| ·供体细胞内核仁蛋白(B23、UBF)的分布 | 第37-38页 |
| ·不同时期核移植胚胎免疫荧光观察核仁蛋白 B23、UBF 的分布 | 第38页 |
| ·细胞胚胎中期 UBF 点观察 | 第38页 |
| ·qPCR 实验检测供体细胞和胚胎各时期的核仁相关基因表达 | 第38-42页 |
| ·样品的收集和保存 | 第38-39页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第39-40页 |
| ·RNA 反转录成 cDNA | 第40页 |
| ·引物设计和内参设置 | 第40-41页 |
| ·qPCR 反应体系的设计 | 第41-42页 |
| ·各引物标准曲线和扩增效率的测定 | 第42页 |
| ·qPCR 实验设计 | 第42页 |
| ·供体细胞和 4 细胞胚胎的 rDNA 甲基化检测 | 第42-47页 |
| ·细胞和培养样品的准备 | 第42-43页 |
| ·rDNA 甲基化检测的目标序列选取和引物设计 | 第43页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第43-44页 |
| ·亚硫酸盐转化 | 第44-45页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第45页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第45-46页 |
| ·目的片段与 T 载体相连 | 第46页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第46-47页 |
| ·阳性菌落的筛选与测序 | 第47页 |
| ·甲基化结果分析方法 | 第47页 |
| ·实验设计和数据统计分析 | 第47-48页 |
| 4、结果 | 第48-85页 |
| ·核移植方法的确定 | 第48-49页 |
| ·供体细胞株的建立 | 第49-51页 |
| ·供体细胞的建立、生长和传代 | 第49-50页 |
| ·供体细胞核型分析 | 第50-51页 |
| ·NT 胚胎和 ICSI 胚胎 2 细胞前核仁前体（NPBs）数目的差异 | 第51-55页 |
| ·小鼠胚胎第一次卵裂前 NPBs 的变化规律 | 第51-52页 |
| ·小鼠胚胎原核融合和第一次卵裂 | 第52-54页 |
| ·ICSI 和 NT 胚胎原核/类原核内 NPBs 的分布 | 第54-55页 |
| ·NT 胚胎和 ICSI 胚胎核仁超微结构的变化 | 第55-57页 |
| ·放线菌素 D（AD）处理供体细胞对核移植胚胎发育的影响 | 第57-60页 |
| ·AD 处理后颗粒细胞内的核仁蛋白分布变化 | 第57-58页 |
| ·AD 处理对细胞的毒性作用 | 第58-60页 |
| ·AD 处理后的颗粒细胞核移植胚胎植入前发育能力 | 第60页 |
| ·供体细胞 rDNA 活性的比较 | 第60-65页 |
| ·供体细胞活性 NORs 数目的比较 | 第60-63页 |
| ·供体细胞 rDNA 甲基化水平比较 | 第63-65页 |
| ·供体细胞 rRNA 合成和加工活性的比较 | 第65-67页 |
| ·供体细胞内核仁蛋白的分布 | 第65-66页 |
| ·供体细胞内核仁相关基因表达水平的比较 | 第66-67页 |
| ·NT 胚胎和 ICSI 胚胎植入前发育能力的比较 | 第67-69页 |
| ·NT 胚胎和 ICSI 胚胎植入前发育不同阶段核仁蛋白分布的变化 | 第69-77页 |
| ·核移植/精子注射后 1h 内核仁蛋白的分布 | 第69-72页 |
| ·原核形成时期核仁蛋白的分布 | 第72-74页 |
| ·植入前发育不同阶段核仁蛋白的分布 | 第74-77页 |
| ·NT 胚胎 4 细胞期活性 NOR 的数目的比较 | 第77-79页 |
| ·NT 胚胎 4 细胞期 rDNA 甲基化水平的比较 | 第79-80页 |
| ·NT 胚胎和 ICSI 胚胎植入前发育不同阶段核仁相关基因的表达 | 第80-85页 |
| ·2 细胞阶段核仁相关基因的表达 | 第80-81页 |
| ·4 细胞阶段核仁相关基因的表达 | 第81-82页 |
| ·桑葚胚期核仁相关基因的表达 | 第82-83页 |
| ·囊胚期核仁相关基因的表达 | 第83-85页 |
| 5、讨论 | 第85-92页 |
| ·核移植方法的选择 | 第85页 |
| ·原核期胚胎中 NPBs 的分布和变化 | 第85-86页 |
| ·放线菌素 D 处理供体细胞对核移植胚胎发育的影响 | 第86-87页 |
| ·不同来源胚胎核仁的超微结构 | 第87页 |
| ·ESCs、CCs 和 MEFs 的 rDNA 活性差异 | 第87-88页 |
| ·供体细胞入卵后的核仁蛋白分布的变化和 rRNA 转录的终止 | 第88-89页 |
| ·供体细胞 rDNA 活性与相应核移植胚胎 rDNA 活性、rRNA 转录和加工以及胚胎植入前发育能力的关系 | 第89-91页 |
| ·rDNA 激活与克隆胚胎的发育能力 | 第91-92页 |
| 6、结论 | 第92-94页 |
| 8、参考文献 | 第94-106页 |
| 研究成果 | 第106页 |
