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美洲南瓜苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因克隆、表达分析及品种抗灰霉病研究

摘要第1-5页
Summary第5-7页
目录第7-12页
第一章 文献综述第12-31页
 1 美洲南瓜及其种皮研究进展第12-15页
   ·美洲南瓜研究进展第12-14页
     ·美洲南瓜营养价值及光合特性第12-13页
     ·美洲南瓜病害研究第13页
     ·美洲南瓜分子标记及基因克隆研究第13-14页
   ·裸仁美洲南瓜种皮性状及其相关酶活性研究第14-15页
 2 苯丙氨酸解氨酶(PAL)的研究进展第15-24页
   ·PAL 的存在和分布第16-17页
   ·PAL 的基本特性第17页
   ·PAL 的三维结构第17-18页
   ·PAL 对植物生理代谢的意义第18页
     ·在细胞分化和木质化中的作用第18页
     ·在植物色素形成过程中的作用第18页
     ·在调控黄酮类化合物合成中的作用第18页
   ·PAL 在植物逆境中的作用第18-20页
     ·PAL 在植物抗病中的作用第19页
     ·PAL 参与植物抗病的机制第19-20页
     ·PAL 与植物抗虫性的关系第20页
   ·PAL 基因的表达和克隆第20-24页
     ·植物 PAL 基因的结构第20页
     ·植物 PAL 基因表达的特点第20-21页
     ·植物 PAL 酶及基因的表达调控第21-22页
     ·PAL 基因的克隆及序列分析第22-24页
 3 实时荧光定量(FQ-PCR)研究进展第24-26页
   ·组织表达特异性分析第25页
   ·非生物胁迫条件下基因表达分析第25-26页
   ·生物胁迫条件下基因表达分析第26页
 4 灰霉病及其与植物相关防御酶活性的关系第26-31页
   ·灰霉病菌的分类学地位和形态学特征第27页
   ·瓜类灰霉病的发病症状第27页
   ·植物对灰霉病的抗性及与防御酶活性的关系第27-31页
     ·接种灰霉病病菌对植物的影响第27-29页
     ·外源物质诱导植物对灰霉病的抗性及与防御酶活性的关系第29-31页
第二章 美洲南瓜种皮 PAL 基因 cDNA 片段克隆及分析第31-47页
 1 材料与方法第31-35页
   ·试验材料第31页
   ·试验方法第31-35页
     ·主要药品及仪器第31-32页
     ·种皮总 RNA 的提取第32-34页
     ·cDNA 第一链的合成第34页
     ·美洲南瓜 PAL 基因 cDNA 片段的克隆第34页
     ·PCR 产物的回收、克隆及测序第34-35页
     ·美洲南瓜 PAL 基因的生物信息学分析第35页
 2 结果分析第35-45页
   ·美洲南瓜种皮总 RNA 的提取第35页
   ·美洲南瓜种皮 PAL 基因 cDNA 片段的扩增第35-37页
   ·美洲南瓜种皮 PAL 基因 cDNA 片段序列分析第37-42页
     ·有壳美洲南瓜种皮 PAL 基因 cDNA 片段序列分析第37-39页
     ·裸仁美洲南瓜种皮 PAL 基因 cDNA 片段序列分析第39-42页
   ·有壳和裸仁美洲南瓜种皮 PAL 基因核苷酸和氨基酸序列比对分析第42-45页
 3 讨论与结论第45-47页
第三章 有壳美洲南瓜种皮 PAL 基因全长序列克隆及其生物信息学分析第47-70页
 1 材料与方法第47-53页
   ·试验材料第47-48页
   ·试验方法第48-53页
     ·主要药品及仪器第48页
     ·种皮总 RNA 的提取第48-49页
     ·cDNA 第一链的合成第49-50页
     ·有壳美洲南瓜(P3)种皮 PAL 基因末端快速克隆(RACE)第50-53页
     ·P3 种皮 PAL 基因核苷酸序列及其编码的氨基酸序列生物信息学分析第53页
 2 结果分析第53-68页
   ·有壳美洲南瓜(P3)种皮总 RNA 的提取第53-54页
   ·P3 种皮 PAL 基因 cDNA 中间序列的克隆及分析第54页
   ·P3 种皮 PAL 基因全长序列的克隆第54-55页
     ·种皮 PAL 基因 3′端和 5′端序列的获得第54-55页
     ·种皮 PAL 基因全长序列的获得第55页
   ·有壳美洲南瓜(P3)种皮 PAL 基因(CP-PAL)生物信息学分析第55-62页
     ·CP-PAL 基因全长核苷酸序列及其推导的氨基酸序列分析第55页
     ·CP-PAL 蛋白功能域分析第55-58页
     ·CP-PAL 蛋白理化性质分析第58页
     ·CP-PAL 蛋白导肽、信号肽及亚细胞定位预测与分析第58-59页
     ·CP-PAL 蛋白功能位点分析第59页
     ·CP-PAL 蛋白跨膜结构域分析第59页
     ·CP-PAL 蛋白磷酸化位点预测第59-60页
     ·CP-PAL 蛋白疏水性/亲水性预测第60-61页
     ·CP-PAL 蛋白二级结构分析第61页
     ·CP-PAL 基因编码氨基酸固有无序化特性分析第61-62页
   ·CP-PAL 基因编码氨基酸序列多重比较、系统进化树构建及蛋白三级结构预测第62-68页
 3 讨论与结论第68-70页
第四章 裸仁美洲南瓜种皮 PAL 基因全长序列克隆及其生物信息学分析第70-91页
 1 材料与方法第70-73页
   ·试验材料第70页
   ·试验方法第70-73页
     ·主要药品及仪器第70页
     ·种皮总 RNA 的提取第70-71页
     ·cDNA 第一链的合成第71页
     ·裸仁美洲南瓜(P13)种皮 PAL 基因末端快速克隆(RACE)第71-72页
     ·P13 种皮 PAL 基因核苷酸序列及其编码的氨基酸序列生物信息学分析第72-73页
 2 结果分析第73-89页
   ·裸仁美洲南瓜(P13)种皮总 RNA 的提取第73页
   ·P13 种皮 PAL 基因 cDNA 中间序列的克隆及分析第73-74页
   ·P13 种皮 PAL 基因全长序列的克隆第74-75页
     ·PAL 基因 3′端和 5′端序列的获得第74-75页
     ·种皮 PAL 基因全长序列的获得第75页
   ·裸仁美洲南瓜(P13)种皮 PAL 基因(CPL-PAL)生物信息学分析第75-82页
     ·CPL-PAL 基因全长核苷酸序列及其推导的氨基酸序列对比分析第75页
     ·CPL-PAL 蛋白功能域分析第75-78页
     ·CPL-PAL 蛋白理化性质分析第78页
     ·CPL-PAL 蛋白导肽及信号肽分析第78-79页
     ·CPL-PAL 蛋白功能位点分析第79页
     ·CPL-PAL 蛋白亚细胞定位及跨膜结构域分析第79-80页
     ·CPL-PAL 蛋白磷酸化位点预测第80页
     ·CPL-PAL 蛋白疏水性/亲水性预测第80-81页
     ·CPL-PAL 蛋白二级结构分析第81页
     ·CPL-PAL 基因编码氨基酸固有无序化特性分析第81-82页
   ·CPL-PAL 基因编码氨基酸序列多重比较、系统进化树构建及蛋白三级结构预测第82-89页
 3 讨论与结论第89-91页
第五章 PAL 基因在有壳和裸仁美洲南瓜种皮及植株中表达特性分析第91-101页
 1 材料与方法第91-94页
   ·试验材料第91-92页
   ·试验方法第92-94页
     ·主要药品及仪器第92页
     ·植物样品 PAL 酶活性测定第92-93页
     ·植物样品总 RNA 的提取第93页
     ·cDNA 第一链的合成第93页
     ·实时荧光定量 PCR第93-94页
 2 结果分析第94-99页
   ·有壳和裸仁美洲南瓜种皮发育过程中 PAL 基因的表达特性分析第94-95页
     ·PAL 基因在有壳美洲南瓜(P3,P5)种皮发育过程中的表达特性分析第94页
     ·PAL 基因在裸仁美洲南瓜(P13,P15)种皮发育过程中的表达特性分析第94-95页
     ·PAL 基因在有壳和裸仁美洲南瓜种皮中的表达差异分析第95页
   ·有壳和裸仁美洲南瓜植株不同发育时期不同组织部位 PAL 酶活性的变化第95-97页
     ·有壳美洲南瓜(Y1,Y2)植株不同发育时期不同组织部位 PAL 酶活性分析第95-96页
     ·裸仁美洲南瓜(W1,W2)植株不同发育时期不同组织部位 PAL 酶活性分析第96页
     ·PAL 酶活性在有壳和裸仁美洲南瓜植株不同组织部位对比分析第96-97页
   ·有壳和裸仁美洲南瓜植株不同发育时期不同组织部位 PAL 基因的表达特性分析第97-99页
     ·PAL 基因在有壳美洲南瓜(Y1,Y2)植株不同发育时期不同组织部位表达特性分析第97-98页
     ·PAL 基因在裸仁美洲南瓜(W1,W2)植株不同发育时期不同组织部位表达特性分析第98页
     ·PAL 基因在有壳和裸仁美洲南瓜植株不同组织部位表达差异分析第98-99页
 3 讨论与结论第99-101页
第六章 灰霉病菌对裸仁美洲南瓜植株防御酶活性及 PAL 基因表达的影响第101-115页
 1 材料与方法第102-105页
   ·试验材料第102页
   ·试验方法第102-105页
     ·灰霉病菌孢子悬浮液的制备第102页
     ·接种处理第102页
     ·病情指数统计第102页
     ·植株样品叶绿素含量的测定第102-103页
     ·植株样品 PAL 酶活性测定第103页
     ·植株样品 POD 酶活性测定第103-104页
     ·植株样品 PPO 酶活性测定第104-105页
     ·实时荧光定量 PCR第105页
 2 结果分析第105-111页
   ·裸仁美洲南瓜抗病和感病品种病情指数比较第105-106页
   ·裸仁美洲南瓜抗病和感病品种不同组织部位叶绿素含量变化第106-107页
   ·裸仁美洲南瓜抗病和感病品种不同组织部位防御酶活性变化第107-110页
     ·裸仁美洲南瓜抗病和感病品种不同组织部位 PAL 酶活性变化第107-108页
     ·裸仁美洲南瓜抗病和感病品种不同组织部位 POD 酶活性变化第108-109页
     ·裸仁美洲南瓜抗病和感病品种不同组织部位 PPO 酶活性变化第109-110页
   ·裸仁美洲南瓜抗病和感病品种不同组织部位 PAL 基因表达特性分析第110-111页
 3 讨论与结论第111-115页
第七章 主要结论及创新点第115-116页
 1 主要结论第115页
 2 创新点第115-116页
附图第116-123页
致谢第123-124页
作者简介第124-125页
导师简介第125-127页
参考文献第127-138页

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