| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一部分 文献综述及生物信息学分析 | 第11-22页 |
| 第一章 文献综述及选题目的与意义 | 第11-15页 |
| 1. 疱疹病毒UL7基因及其编码蛋白的研究进展 | 第11-14页 |
| ·疱疹病毒UL7基因的基本特征 | 第11页 |
| ·UL7基因序列及其编码蛋白的结构特点 | 第11-12页 |
| ·UL7基因序列特点 | 第11页 |
| ·UL7基因的类型 | 第11-12页 |
| ·UL7基因编码蛋白的特点 | 第12页 |
| ·UL7蛋白的功能 | 第12-13页 |
| ·UL7蛋白在病毒组装释放方面的作用 | 第12-13页 |
| ·UL7蛋白对神经毒力的作用 | 第13页 |
| ·UL7蛋白对线粒体的调节作用 | 第13页 |
| ·UL7蛋白与其他蛋白的作用 | 第13-14页 |
| 2. 选题目的与意义 | 第14-15页 |
| 第二章 鸭瘟病毒UL7基因及编码蛋白的生物信息学分析 | 第15-22页 |
| 1. 材料 | 第15页 |
| 2. 方法 | 第15页 |
| ·UL7基因序列分析 | 第15页 |
| ·UL7氨基酸序列分析 | 第15页 |
| 3. 结果 | 第15-20页 |
| ·UL7基因序列分析 | 第15-16页 |
| ·UL7氨基酸序列分析 | 第16页 |
| ·UL7蛋白的功能预测 | 第16-18页 |
| ·保守区 | 第16-17页 |
| ·信号肽 | 第17页 |
| ·功能位点 | 第17-18页 |
| ·跨膜区 | 第18页 |
| ·亚细胞定位 | 第18页 |
| ·二级结构预测 | 第18页 |
| ·疏水性及抗原性预测 | 第18-19页 |
| ·系统进化树分析 | 第19-20页 |
| 4. 讨论 | 第20-22页 |
| 第二部分 试验研究 | 第22-52页 |
| 第三章 UL7基因的原核表达、蛋白纯化及多抗的制备 | 第22-34页 |
| 1. 材料 | 第22-23页 |
| ·毒株、菌株、细胞和载体 | 第22页 |
| ·实验动物 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要试剂的配制 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| 2. 方法 | 第23-29页 |
| ·DPV UL7基因的PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·引物设计 | 第23页 |
| ·DPV基因组的提取 | 第23页 |
| ·UL7基因的PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·UL7基因的T克隆质粒的构建及其鉴定 | 第24页 |
| ·UL7基因的T克隆质粒的构建 | 第24页 |
| ·克隆质粒的鉴定 | 第24页 |
| ·UL7基因重组表达质粒的构建 | 第24-26页 |
| ·表达质粒的构建思路 | 第24-25页 |
| ·感受态细胞DH5α的制备 | 第25页 |
| ·pMD20-T-UL7及pET-32a(+)表达质粒的抽提与胶回收酶切产物 | 第25-26页 |
| ·酶切回收产物pET-32a(+)与UL7片段的连接 | 第26页 |
| ·连接产物转化感受态细胞DH5α | 第26页 |
| ·筛选阳性克隆 | 第26页 |
| ·UL7重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第26-27页 |
| ·质粒pET32a-UL7转化至宿主菌BL21 pLysS中 | 第26页 |
| ·UL7重组蛋白在表达菌株BL21pLysS中的分布 | 第26-27页 |
| ·诱导温度优化 | 第27页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第27页 |
| ·诱导时间的优化 | 第27页 |
| ·UL7重组蛋白的纯化及鉴定 | 第27-28页 |
| ·表达菌的处理 | 第27页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第27页 |
| ·纯化重组蛋白的鉴定 | 第27-28页 |
| ·兔抗DPV UL7多克隆抗体的制备 | 第28-29页 |
| ·免疫原的制备 | 第28页 |
| ·家兔免疫程序 | 第28页 |
| ·琼脂扩散试验检测兔抗UL7效价 | 第28-29页 |
| ·兔抗UL7 IgG的纯化与鉴定 | 第29页 |
| ·硫酸铵粗提兔抗UL7 IgG | 第29页 |
| ·High-Q阴离子交换层析纯化兔抗UL7的IgG | 第29页 |
| 3. 结果 | 第29-32页 |
| ·DPV UL7基因的克隆与鉴定 | 第29页 |
| ·原核表达载体的构建与鉴定 | 第29-30页 |
| ·UL7基因的诱导表达及条件优化 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白的纯化与鉴定 | 第31-32页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第32页 |
| 4.讨论 | 第32-34页 |
| 第四章 鸭瘟病毒UL7基因的转录时相及类型分析 | 第34-41页 |
| 1. 材料 | 第34页 |
| ·毒株、细胞和质粒 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| 2. 方法 | 第34-36页 |
| ·DPV体外感染宿主细胞UL7基因的转录时相分析 | 第34-36页 |
| ·qRT-PCR引物设计及特异性分析 | 第34-35页 |
| ·标准曲线的建立 | 第35页 |
| ·细胞的培养和总RNA的提取 | 第35页 |
| ·样品的检测及数据分析 | 第35-36页 |
| ·DPV UL7基因类型的分析 | 第36页 |
| ·细胞的培养及模板的制备 | 第36页 |
| ·样品的检测 | 第36页 |
| 3. 结果 | 第36-39页 |
| ·引物特异性的分析 | 第36页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第36-37页 |
| ·样品的检测与分析 | 第37-38页 |
| ·DPV UL7基因的类型分析 | 第38-39页 |
| 4. 讨论 | 第39-41页 |
| 第五章 鸭瘟病毒UL7蛋白在感染DEF内的定位分析 | 第41-46页 |
| 1. 材料 | 第41页 |
| ·毒株、细胞与抗体 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·主要仪器设备 | 第41页 |
| 2. 方法 | 第41-42页 |
| ·间接免疫荧光方法的建立及条件优化 | 第41-42页 |
| ·间接免疫荧光方法的建立 | 第41-42页 |
| ·间接免疫荧光法条件的优化 | 第42页 |
| ·方法的特异性检测 | 第42页 |
| ·结果判定 | 第42页 |
| ·UL7蛋白在DEF内定位的动态分析 | 第42页 |
| 3. 结果 | 第42-44页 |
| ·检测方法的建立与优化结果 | 第42页 |
| ·特异性试验结果 | 第42-43页 |
| ·DPV UL7蛋白在感染病毒的宿主细胞中的定位分析 | 第43-44页 |
| 4. 讨论 | 第44-46页 |
| 第六章 鸭瘟病毒UL7基因真核表达载体的构建及表达分析 | 第46-52页 |
| 1. 材料 | 第46页 |
| ·毒株、细胞、载体与抗体 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·主要仪器设备 | 第46页 |
| 2. 方法 | 第46-48页 |
| ·DPV UL7基因真核表达载体的构建 | 第46-48页 |
| ·DF-1细胞的培养 | 第46-47页 |
| ·真核表达质粒的构建策略与连接 | 第47页 |
| ·重组质粒的筛选及鉴定 | 第47页 |
| ·重组质粒转染DF-1 | 第47-48页 |
| ·重组质粒的表达分析 | 第48页 |
| ·RT-PCR分析 | 第48页 |
| ·间接荧光(IFA)鉴定 | 第48页 |
| ·Western blot检测 | 第48页 |
| 3. 结果 | 第48-50页 |
| ·真核重组质粒的构建及鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组质粒pcDNA-UL7的表达分析 | 第49-50页 |
| ·RT-PCR鉴定 | 第49页 |
| ·间接免疫荧光鉴定UL7基因的表达 | 第49-50页 |
| ·Western blot鉴定UL7基因的表达 | 第50页 |
| 4. 讨论 | 第50-52页 |
| 第三部分 结论 | 第52-53页 |
| 第四部分 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介以及攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第58页 |
