| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第6-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-28页 |
| 1.真菌遗传转化研究进展 | 第9-11页 |
| ·根癌农杆菌介导的真菌遗传转化的原理 | 第9-10页 |
| ·根癌农杆菌介导的真菌遗传转化的真菌种类 | 第10-11页 |
| 2.启动子概述 | 第11-21页 |
| ·启动子的构造 | 第11-13页 |
| ·启动子的类型 | 第13-15页 |
| ·组成型启动子 | 第13-14页 |
| ·组织特异性表达型启动子 | 第14页 |
| ·诱导表达型启动子 | 第14-15页 |
| ·研究启动子的技术方法 | 第15-21页 |
| ·启动子的预测 | 第15页 |
| ·5'快速扩增cDNA末端(5'RACE)分离启动子 | 第15-16页 |
| ·启动子克隆方法 | 第16-21页 |
| 3 重叠延伸PCR技术合成长片段基因 | 第21-23页 |
| ·重叠延伸PCR技术原理 | 第21-22页 |
| ·重叠延伸PCR引物设计 | 第22页 |
| ·重叠延伸PCR的应用 | 第22-23页 |
| ·用于长片段基因的合成 | 第22-23页 |
| ·用于定点突变研究 | 第23页 |
| ·用于构建融合基因 | 第23页 |
| ·用于基因敲除 | 第23页 |
| 4.油菜菌核病研究概况 | 第23-25页 |
| ·菌核菌的病原学特性 | 第24页 |
| ·菌核菌的致病性 | 第24-25页 |
| ·防治措施 | 第25页 |
| 5.松材线虫病研究概况 | 第25-26页 |
| 6.本课题立题依据、研究目的内容及技术路线 | 第26-28页 |
| 第二章 真菌强启动子活性片段的克隆及转基因载体的构建 | 第28-48页 |
| 1 材料 | 第28-31页 |
| ·菌种及质粒材料 | 第28页 |
| ·分子生物学用酶及DNA分子量Marker | 第28页 |
| ·试剂盒及引物 | 第28页 |
| ·常用生物信息分析软件及网站 | 第28-29页 |
| ·实验仪器设备 | 第29-30页 |
| ·实验使用培养基 | 第30页 |
| ·缓冲液及相关溶液、试剂 | 第30-31页 |
| 2 方法 | 第31-38页 |
| ·油菜菌核菌基因组DNA提取 | 第31-32页 |
| ·细菌基因组DNA的小量提取 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·质粒DNA的纯化 | 第34页 |
| ·质粒及PCR扩增产物酶切 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增产物及酶切产物回收 | 第35页 |
| ·酶切产物连接体系 | 第35-36页 |
| ·热激转化大肠杆菌感受态细胞 | 第36页 |
| ·电击转化根癌农杆菌感受态细胞 | 第36页 |
| ·转化产物PCR验证 | 第36-37页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第37页 |
| ·灰葡萄孢分生孢子的收集 | 第37页 |
| ·农杆菌介导的灰葡萄孢转化 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-47页 |
| ·酸性蛋白酶基因(acp)启动子活性片段的克隆 | 第38-40页 |
| ·3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(gpd)启动子活性片段的克隆 | 第40-41页 |
| ·潮霉素抗性筛选基因(hph)片段及acp+hph片段的获得 | 第41-43页 |
| ·绿色荧光蛋白报告基因(gfp)片段及gpd+gfp片段的获得 | 第43-44页 |
| ·体外连接获得（acp+hph+gpd+gfp）片段 | 第44-46页 |
| ·构建的重组质粒 | 第46页 |
| ·灰葡萄孢菌转化子的获得 | 第46-47页 |
| 4 本文小结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 作者简介 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 附录 | 第57-58页 |
