| 目录 | 第1-11页 |
| 第一部分 碳纳米管对小鼠肺毒性的研究 | 第11-64页 |
| 中文摘要 | 第12-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 前言 | 第14-18页 |
| 第一节 修饰化碳纳米管能通过产生促炎性细胞因子导致小鼠急性肺损伤 | 第18-27页 |
| 1 实验材料 | 第18页 |
| ·实验动物 | 第18页 |
| ·纳米材料 | 第18页 |
| ·实验试剂 | 第18页 |
| ·实验设备 | 第18页 |
| 2 实验方法 | 第18-21页 |
| ·碳纳米材料的处理 | 第18-19页 |
| ·材料溶液的配制 | 第18-19页 |
| ·修饰化碳纳米管溶液浓度的测定 | 第19页 |
| ·修饰化碳纳米管的电镜分析 | 第19页 |
| ·小鼠肺部病理切片检查及肺组织中炎性浸润细胞计数 | 第19页 |
| ·小鼠支气管肺泡灌洗液中炎症相关因子的测定 | 第19-20页 |
| ·小鼠支气管肺泡灌洗液的准备 | 第19-20页 |
| ·ELISA检测细胞因子步骤 | 第20页 |
| ·小鼠肺组织血管壁渗透性实验(Evans Blue实验) | 第20-21页 |
| ·小鼠动脉血氧分压检测 | 第21页 |
| 3 实验结果 | 第21-27页 |
| ·修饰化的碳纳米管的显微结构 | 第21-23页 |
| ·修饰化的碳纳米管处理18h后小鼠肺组织病理变化 | 第23-24页 |
| ·修饰化的碳纳米管给药18h后小鼠BALF中细胞因子含量上升 | 第24-25页 |
| ·AMIDE修饰化的碳纳米管给药18 h后引起小鼠肺组织血管渗透性增加 | 第25-26页 |
| ·AMIDE修饰化的碳纳米管给药18 h后引起小鼠肺动脉血氧分压下降 | 第26-27页 |
| 第二节 修饰化碳纳米管通过MyD88-NFκB-cytokine信号通路导致小鼠急性肺损伤 | 第27-39页 |
| 1 实验材料 | 第27-28页 |
| ·实验动物 | 第27页 |
| ·纳米材料 | 第27页 |
| ·实验试剂 | 第27-28页 |
| ·抗体 | 第27页 |
| ·化学试剂 | 第27-28页 |
| ·实验设备 | 第28页 |
| 2 实验方法 | 第28-34页 |
| ·碳纳米材料的处理 | 第28页 |
| ·材料溶液的配制 | 第28页 |
| ·修饰化碳纳米管溶液浓度的测定 | 第28页 |
| ·NF-κB转基因小鼠验证实验 | 第28-29页 |
| ·小鼠肺泡中单核巨噬细胞中NF-κB和IκB-α的表达分析 | 第29-33页 |
| ·Western blotting样品准备 | 第29页 |
| ·主要溶液的配制 | 第29-30页 |
| ·Western blotting检测IκB-α的表达分析 | 第30-31页 |
| ·EMSA样品的制备 | 第31-32页 |
| ·EMSA所用溶液的配制 | 第32页 |
| ·EMSA检测NFκB的表达分析(参照Thermo公司说明书) | 第32-33页 |
| ·Myd88基因敲除小鼠BALF中炎症相关因子的测定 | 第33-34页 |
| ·Tlr4基因敲除小鼠BALF中炎症相关因子的测定 | 第34页 |
| 3 实验结果 | 第34-39页 |
| ·AMIDE修饰化的碳纳米管能引起NFκB-Luc转基因小鼠中荧光素酶的激活 | 第34-35页 |
| ·EMSA检测显示AMIDE修饰化的碳纳米管能增加小鼠肺组织核NFκB蛋白 | 第35-36页 |
| ·修饰化碳纳米管处理Myd88基因敲除小鼠能引起BALF中IL-6水平下降 | 第36-37页 |
| ·修饰化碳纳米管处理Tlr4基因敲除小鼠能引起BALF中IL-6水平下降 | 第37-39页 |
| 第三节 皮质类固醇类激素可减轻修饰化碳纳米管导致的小鼠急性肺损伤 | 第39-42页 |
| 1 实验材料 | 第39页 |
| ·实验动物 | 第39页 |
| ·纳米材料 | 第39页 |
| ·实验试剂 | 第39页 |
| ·实验设备 | 第39页 |
| 2 实验方法 | 第39-40页 |
| ·碳纳米材料的处理 | 第39-40页 |
| ·材料溶液的配制 | 第39-40页 |
| ·修饰化碳纳米管溶液浓度的测定 | 第40页 |
| ·皮质类固醇类药物治疗对小鼠BALF中炎症细胞因子的影响 | 第40页 |
| 3 实验结果 | 第40-42页 |
| ·药物处理能显著降低修饰化碳纳米管处理后小鼠BALF中IL-6含量 | 第40-42页 |
| 第四节 检测碳纳米管引起的急性肺损伤自我修复,肺纤维化,肉芽肿以及DNA损伤 | 第42-55页 |
| 1 实验材料 | 第42-43页 |
| ·实验动物 | 第42页 |
| ·纳米材料 | 第42页 |
| ·实验试剂 | 第42页 |
| ·抗体 | 第42页 |
| ·化学试剂 | 第42页 |
| ·实验设备 | 第42-43页 |
| 2 实验方法 | 第43-47页 |
| ·碳纳米材料的处理 | 第43页 |
| ·材料溶液的配制 | 第43页 |
| ·修饰化碳纳米管溶液浓度的测定 | 第43页 |
| ·小鼠肺部病理切片检查及肺组织炎性浸润细胞计数 | 第43-44页 |
| ·小鼠肺部病理切片及马松染色检测 | 第44-45页 |
| ·小鼠肺部病理切片及免疫组化检测 | 第45页 |
| ·修饰化碳纳米管处理14 d后小鼠BALF中炎症相关因子的测定 | 第45-46页 |
| ·小鼠支气管肺泡灌洗液的准备 | 第45-46页 |
| ·修饰化碳纳米管处理14 d后小鼠肺组织血管壁渗透性实验 | 第46-47页 |
| ·修饰化碳纳米管处理14 d后小鼠动脉血氧分压检测 | 第47页 |
| 3 实验结果 | 第47-55页 |
| ·修饰化的碳纳米管给药14 d后小鼠BALF中细胞因子水平恢复正常 | 第47-48页 |
| ·AMIDE修饰化的碳纳米管处理14 d后小鼠肺血管通透性恢复正常 | 第48-49页 |
| ·AMIDE修饰化的碳纳米管处理14 d后小鼠肺动脉血氧分压恢复正常 | 第49-50页 |
| ·修饰化的碳纳米管给药14 d后小鼠肺组织病理变化 | 第50-52页 |
| ·高剂量修饰化的碳纳米管给药14 d后能引起小鼠肺组织纤维化 | 第52-53页 |
| ·修饰化的碳纳米管给药后能引起小鼠肺组织DNA损伤 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 讨论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 第二部分 甲型H1N1流感病毒在人呼吸上皮细胞及雪貂中的致病性研究 | 第64-97页 |
| 中文摘要 | 第65-66页 |
| Abstract | 第66-68页 |
| 前言 | 第68-70页 |
| 第一节 甲型H1N1流感病毒的分离、培养、浓缩 | 第70-73页 |
| 1 实验材料 | 第70页 |
| ·仪器 | 第70页 |
| ·试剂 | 第70页 |
| ·病毒来源 | 第70页 |
| ·病毒及载体 | 第70页 |
| 2 实验方法 | 第70-73页 |
| ·活胚检查 | 第70-71页 |
| ·鸡胚尿囊腔接种 | 第71页 |
| ·甲型H1N1流感病毒的收获 | 第71页 |
| ·鸡胚尿囊液中病毒的粗离 | 第71-72页 |
| ·超速离心法浓缩流感病毒 | 第72-73页 |
| 第二节 甲型H1N1流感病毒的血凝单位及50%培养组织感染剂量(TCID50)测定 | 第73-76页 |
| 1 实验材料 | 第73页 |
| ·仪器 | 第73页 |
| ·试剂 | 第73页 |
| ·病毒 | 第73页 |
| ·细胞 | 第73页 |
| 2 方法 | 第73-76页 |
| ·制备1%鸡红细胞悬液 | 第73-74页 |
| ·MDCK细胞的培养 | 第74页 |
| ·甲型H1N1流感病毒的血凝单位测定 | 第74-75页 |
| ·甲型H1N1流感病毒50%培养组织感染剂量(TCID50)的测定 | 第75-76页 |
| 第三节 甲型H1N1流感病毒对A549细胞的毒性研究 | 第76-85页 |
| 1 实验材料 | 第76-77页 |
| ·仪器 | 第76页 |
| ·试剂 | 第76页 |
| ·抗体 | 第76-77页 |
| ·病毒 | 第77页 |
| ·细胞 | 第77页 |
| 2 实验方法 | 第77-81页 |
| ·主要溶液的配制 | 第77-78页 |
| ·细胞裂解液的配制 | 第77页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳及相关缓冲液的配制 | 第77-78页 |
| ·贴壁细胞培养 | 第78页 |
| ·MTS方法测定流感病毒对细胞活性的影响 | 第78页 |
| ·TUNEL方法检测细胞凋亡 | 第78-79页 |
| ·Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白 | 第79-81页 |
| ·Western blotting样品准备 | 第79页 |
| ·Western blotting检测caspase-3、PARP蛋白质的表达 | 第79-81页 |
| 3 实验结果 | 第81-85页 |
| ·甲型H1N1流感病毒对A549细胞活性影响的MTS实验 | 第81-82页 |
| ·甲型H1N1流感病毒诱导A549细胞发生凋亡 | 第82-83页 |
| ·甲型H1N1流感病毒处理A549细胞引起Caspase 3的剪切 | 第83-85页 |
| 第四节 甲型H1N1流感病毒感染雪貂肺损伤模型的建立 | 第85-92页 |
| 1 实验材料 | 第85-86页 |
| ·仪器 | 第85页 |
| ·试剂 | 第85页 |
| ·病毒 | 第85页 |
| ·动物 | 第85-86页 |
| 2 实验方法 | 第86-88页 |
| ·甲型H1N1流感病毒致雪貂体重及体温变化 | 第86页 |
| ·甲型H1N1流感病毒感染雪貂后鼻甲膜、气管、肺脏、肝、脾、肾、脑组织中病毒的滴度测定 | 第86-87页 |
| ·甲型H1N1流感病毒致雪貂肺组织病理变化 | 第87-88页 |
| 3 实验结果 | 第88-92页 |
| ·甲型H1N1流感病毒感染致雪貂体重变化 | 第88页 |
| ·甲型H1N1流感病毒感染致雪貂体温变化 | 第88-89页 |
| ·甲型H1N1流感病毒感染致雪貂肺组织病理变化结果 | 第89-90页 |
| ·甲型H1N1流感病毒感染后雪貂不同组织中病毒的滴度(TCID50) | 第90-92页 |
| 小结 | 第92-93页 |
| 讨论 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-97页 |
| 综述一 先天性免疫反应中Toll样受体的协同作用 | 第97-117页 |
| 参考文献 | 第108-117页 |
| 综述二 探索丙型肝炎的治疗对策 | 第117-128页 |
| 参考文献 | 第123-128页 |
| 个人简历 | 第128-130页 |
| 致谢 | 第130-132页 |
