| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-28页 |
| ·研究概况 | 第11页 |
| ·苏云金芽胞杆菌 | 第11-17页 |
| ·Bt 杀虫晶体蛋白 | 第12-14页 |
| ·Bt Cry2A 蛋白 | 第14-16页 |
| ·其他 Bt 生物活性成分 | 第16-17页 |
| ·枯草芽胞杆菌 | 第17-24页 |
| ·枯草芽胞杆菌表达体系 | 第18-19页 |
| ·B. subtilis 转化方法研究 | 第19-22页 |
| ·应用于 B. subtilis 重组菌株的启动子 | 第22-24页 |
| ·芽胞杆菌属表达外源δ-内毒素体系的构建 | 第24-26页 |
| ·本研究的立题依据和意义 | 第26-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-40页 |
| ·材料 | 第28-31页 |
| ·菌株和质粒 | 第28-29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·工具酶和试剂 | 第29-31页 |
| ·方法 | 第31-40页 |
| ·SWISS-MODEL 同源建模 | 第31-32页 |
| ·Bt 总 DNA 的提取 | 第32页 |
| ·B. subtilis 基因组 DNA 的提取 | 第32页 |
| ·引物设计 | 第32-33页 |
| ·PCR 扩增 | 第33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| ·PCR 产物回收和纯化 | 第33-34页 |
| ·SOE-PCR | 第34-35页 |
| ·克隆载体构建 | 第35页 |
| ·E.coli DH5α的转化 | 第35-36页 |
| ·克隆重组质粒的验证 | 第36-37页 |
| ·测序 | 第37页 |
| ·重组表达质粒与整合质粒的构建 | 第37页 |
| ·重组 B. subtilis 的构建及其验证 | 第37-38页 |
| ·总蛋白的提取及其 SDS-PAGE | 第38-39页 |
| ·质粒稳定性测定 | 第39页 |
| ·B. subtilis 生长曲线的绘制 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-56页 |
| ·Cry2Ab8 同源模型 | 第40-41页 |
| ·SOE-PCR | 第41-43页 |
| ·TA 克隆及重组质粒验证 | 第43-44页 |
| ·序列测定及其比对分析 | 第44-47页 |
| ·重组质粒 pAD-PyxiE-cry2Ab 和 pDG-PyxiE-cry2Ab 的构建 | 第47-49页 |
| ·重组质粒转化 E. coli DH5α及其验证 | 第49-51页 |
| ·重组质粒转化 B. subtilis 及其验证 | 第51页 |
| ·质粒结构稳定性的测定 | 第51-52页 |
| ·B. subtilis 的生长曲线绘制 | 第52-54页 |
| ·总蛋白 SDS-PAGE | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 5 结论与展望 | 第58-59页 |
| ·主要结论 | 第58页 |
| ·展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-68页 |
| 致谢 | 第68页 |