| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1.引言 | 第13-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-35页 |
| ·实验材料 | 第15-22页 |
| ·菌种和质粒 | 第15-16页 |
| ·主要试剂和酶类 | 第16页 |
| ·引物序列 | 第16-18页 |
| ·常用缓冲溶液和培养基的配制 | 第18-22页 |
| ·黄孢原毛平革菌的培养基 | 第18-19页 |
| ·大肠杆菌培养基 | 第19-20页 |
| ·溶液和缓冲液 | 第20-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-35页 |
| ·P.chrysosporium的培养 | 第22-23页 |
| ·总RNA的提取 | 第23页 |
| ·RT-PCR | 第23-25页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第23-24页 |
| ·PCR反应 | 第24-25页 |
| ·RACE-PCR克隆全长cDNA | 第25-26页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第25页 |
| ·RACE技术获得全长PcPrx-1 cDNA | 第25-26页 |
| ·质粒DNA提取 | 第26-27页 |
| ·质粒的大批量提取 | 第26页 |
| ·质粒的小批量提取 | 第26-27页 |
| ·重组表达质粒的快速鉴定 | 第27页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·标准转化法 | 第27-28页 |
| ·高频转化法 | 第28页 |
| ·核酸的电泳检测 | 第28页 |
| ·限制性内切酶反应和DNA连接反应 | 第28-29页 |
| ·DNA片段的回收 | 第29-30页 |
| ·低融点琼脂糖凝胶回收法 | 第29页 |
| ·液氮冻融法 | 第29-30页 |
| ·DNA序列测定与分析 | 第30页 |
| ·表达质粒的构建及序列测定 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第31页 |
| ·重组质粒表达测试 | 第31页 |
| ·重组质粒表达产物的可溶性分析 | 第31页 |
| ·His-tag融合蛋白纯化 | 第31-32页 |
| ·变性不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE) | 第32-33页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝染色 | 第33页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第33页 |
| ·非还原性SDS-PAGE分析 | 第33页 |
| ·金属催化氧化质粒DNA切割保护性分析法 | 第33-34页 |
| ·过氧化物酶活性检测 | 第34-35页 |
| 3 结果和分析 | 第35-50页 |
| ·克隆和表达策略 | 第35-36页 |
| ·PcPrx-1全长cDNA的克隆 | 第36-39页 |
| ·P.chrysosporium总RNA的提取 | 第36页 |
| ·PcPrx基因cDNA 5’-端的扩增 | 第36-37页 |
| ·PcPrx基因cDNA 3’-端的扩增 | 第37-38页 |
| ·PcPrx基因全长cDNA的序列及推导蛋白质序列 | 第38-39页 |
| ·PcPrx基因序列分析和三维结构预测 | 第39-44页 |
| ·PcPrx蛋白质序列同源性分析 | 第39-41页 |
| ·进化树分析 | 第41页 |
| ·PcPrx蛋白亲水性和疏水性分析 | 第41-43页 |
| ·PcPrx蛋白质跨膜结构预测 | 第43页 |
| ·PcPrx蛋白质三维模型构建 | 第43-44页 |
| ·PcPrx基因表达的RT-PCR分析 | 第44-45页 |
| ·PcPrx cDNA在大肠杆菌中的表达及其产物的纯化 | 第45-48页 |
| ·表达质粒的构建 | 第45-46页 |
| ·PcPrx-1基因表达产物的SDS-PAGE分析 | 第46-47页 |
| ·重组PcPrx非还原性SDS-PAGE分析 | 第47-48页 |
| ·PcPrx-1蛋白活性分析 | 第48-50页 |
| ·PcPrx-1蛋白的抗氧化活性分析 | 第48-49页 |
| ·金属催化氧化质粒DNA切割保护性分析法 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-57页 |
| ·用SMART-RACE PCR获得全长PcPrx-1 cDNA | 第50-52页 |
| ·RACE引物设计 | 第50-51页 |
| ·RACE常见问题 | 第51-52页 |
| ·cDNA片段的密码子偏爱性分析 | 第52-53页 |
| ·PcPrx-1cDNA序列的同源性分析 | 第53-54页 |
| ·PcPrx-1的差异表达分析 | 第54页 |
| ·PcPrx-1基因在大肠杆菌中的表达 | 第54-57页 |
| 小结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 文献综述 | 第61-89页 |
| cDNA末端快速扩增技术和抗氧化蛋白Peroxiredoxin家族研究进展 | 第61-84页 |
| 摘要 | 第62-63页 |
| 1.cDNA末端快速扩增技术 | 第63-74页 |
| ·原理及方法 | 第64页 |
| ·cDNA 3’-端的获得 | 第64页 |
| ·cDNA 5’-末端的获得 | 第64-66页 |
| ·RACE产物的鉴定和全长cDNA的获得 | 第66页 |
| ·RACE的改良和优化 | 第66-72页 |
| ·反转录 | 第66-67页 |
| ·加尾反应 | 第67-71页 |
| ·SMART RACE技术 | 第71-72页 |
| ·RACE的其它应用及其前景 | 第72-74页 |
| 2.抗氧化蛋白Peroxiredoxin家族研究进展 | 第74-84页 |
| ·Peroxiredoxin基因家族 | 第74-79页 |
| ·Peroxiredoxin蛋白的功能 | 第79-81页 |
| ·抗氧化与自由基清除作用 | 第79-80页 |
| ·细胞增殖与分化 | 第80-81页 |
| ·参与细胞信号转导 | 第81页 |
| ·其它功能 | 第81页 |
| ·Peroxiredoxin蛋白的抗氧化作用机制 | 第81-82页 |
| ·Peroxiredoxin与肿瘤 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-89页 |
| 在读期间发表或被接收的论文 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
