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西瓜体细胞无性系突变体的筛选及AFLP分析

1 前言第1-25页
 1.1 体细胞无性系变异研究的进展第8-9页
 1.2 体细胞无性系变异的特点第9页
 1.3 体细胞无性系变异的类型第9页
 1.4 植物体细胞无性系变异的机理第9-13页
  1.4.1 细胞水平变异第10页
  1.4.2 分子水平变异第10-13页
   1.4.2.1 基因突变第10-11页
   1.4.2.2 碱基修饰第11页
   1.4.2.3 基因扩增和丢失第11-12页
   1.4.2.4 基因重排第12页
   1.4.2.5 转座子的激活第12-13页
 1.5 体细胞无性系变异的应用第13-14页
 1.6 DNA标记技术概述第14-19页
  1.6.1 RFLP(Restriction fragment length polymorphism)第14-15页
  1.6.2 ISSR标记(inter-simple sequence repeat)第15页
  1.6.3 SCAR标记(Sequence-characterized amplifiedregions)第15-16页
  1.6.4 RGA第16页
  1.6.5 CAPS(cleaved amplified polymorphic sequence)第16-17页
  1.6.6 RAPD(Random Amplified Ploymorphic DNA)第17页
  1.6.7 AFLP(amplified fragment length polymorphism)第17-19页
 1.7 植物病原真菌毒素及其致病的分子机理第19-21页
 1.8 镰刀菌病害及其防治第21-22页
 1.9 西瓜枯萎病的发病机理第22-23页
 1.10 本研究的目的和意义第23-25页
2 材料与方法第25-34页
 2.1 西瓜组织培养植株的再生与抗性植株的筛选第25-26页
  2.1.1 材料和试剂第25页
  2.1.2 实验方法第25-26页
   2.1.2.1 西瓜组织培养植株的再生第25页
   2.1.2.2 抗性诱导与筛选第25-26页
   2.1.2.3 再生植株的田间抗病性鉴定第26页
 2.2 AFLP银染检测实验第26-34页
  2.2.1 实测材料与试剂第26页
  2.2.2 实验方法第26-34页
   2.2.2.1 西瓜植株总DNA的提取第26-28页
   2.2.2.2 模板DNA质量和浓度的检测第28页
   2.2.2.3 模板DNA的酶切反应第28-29页
   2.2.2.4 连接反应第29页
   2.2.2.5 模板DNA片段的预扩增第29-30页
   2.2.2.6 AFLP反应的选择性扩增第30页
   2.2.2.7 PCR产物变性聚丙烯酰胺凝胶电泳第30-34页
    2.2.2.7.1 制胶前的准备工作第31页
    2.2.2.7.2 6%变性聚丙烯酰胺凝胶的制备第31-32页
    2.2.2.7.3 电泳第32页
    2.2.2.7.4 银染第32-34页
3 结果与分析第34-41页
 3.1 不同激素配比对外植体愈伤组织形成和分化的影响第34-35页
 3.2 西瓜组织培养植株再生体系的建立第35页
 3.3 用镰刀菌酸(FA)诱导筛选西瓜体细胞无性系突变体第35-37页
  3.3.1 镰刀菌酸使用浓度的确定第35-36页
  3.3.2 镰刀菌酸对西瓜离体组织培养的影响第36-37页
   3.3.2.1 镰刀菌酸对不定芽诱导的影响第36-37页
   3.3.2.2 镰刀菌酸对根系发育的影响第37页
   3.3.2.3 抗(耐)镰刀菌酸变异体植株的筛选第37页
 3.4 利用AFLP银染技术对变异植株进行分子检测第37-41页
  3.4.1 西瓜植株总DNA的提取第38页
  3.4.2 DNA的酶切以及与adaptor的连接第38页
  3.4.3 西瓜AFLP银染反应体系的建立和优化第38-39页
   3.4.3.1 AFLP反应的预扩增第39页
   3.4.3.2 AFLP反应的选择性扩增第39页
  3.4.4 选择性PCR反应产物的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染显示结果第39-41页
   3.4.4.1 PCR反应产物在PAGE胶上的电泳第39-40页
   3.4.4.2 凝胶的银染显示结果第40-41页
4 讨论第41-43页
5 结论第43-44页
版图第44-48页
参考文献第48-53页
附录第53-58页

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