摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-15页 |
1. 酪蛋白源活性肽研究进展 | 第15-39页 |
·乳蛋白生物活性肽的定义及种类 | 第15-17页 |
·酪蛋白结构及其来源活性肽的种类及序列来源 | 第17-30页 |
·酪蛋白结构 | 第17页 |
·酪蛋白分类 | 第17-18页 |
·α_s-酪蛋白 | 第17页 |
·β-酪蛋白 | 第17-18页 |
·κ-酪蛋白 | 第18页 |
·牛乳酪蛋白的一级结构 | 第18-19页 |
·酪蛋白源生物活性肽序列及功能 | 第19-30页 |
·抗高血压肽 | 第19-23页 |
·抗氧化肽 | 第23-26页 |
·细胞生长调节肽 | 第26-30页 |
·免疫调节肽 | 第30页 |
·其它活性肽 | 第30页 |
·利用乳蛋白制备生物活性肽的技术方法 | 第30-32页 |
·获取乳蛋白生物活性肽采用的方法 | 第30-32页 |
·酶解 | 第31页 |
·微生物发酵法 | 第31-32页 |
·化学合成法 | 第32页 |
·采用基因工程技术 | 第32页 |
·生物活性肽的分离纯化 | 第32-33页 |
·超滤技术 | 第32-33页 |
·离子交换色谱法 | 第33页 |
·大小排阻层析和反相高压液相色谱 | 第33页 |
·高速逆流色谱 | 第33页 |
·乳源蛋白活性肽特定生理功效评价方式 | 第33-34页 |
·技术应用前景 | 第34-36页 |
·本论文主要研究目的意义及技术路线 | 第36-39页 |
2 瑞士乳杆菌的分离、鉴定 | 第39-54页 |
·材料与方法 | 第39-42页 |
·材料 | 第39页 |
·方法 | 第39-42页 |
·培养基 | 第39-41页 |
·培养及形态特征 | 第41页 |
·生理特征测试 | 第41页 |
·生化特性测试 | 第41-42页 |
·16S rRNA 基因的序列分析 | 第42页 |
·仪器设备 | 第42页 |
·结果与分析 | 第42-52页 |
·乳杆菌的形态特征 | 第42-43页 |
·乳杆菌的生理生化鉴定结果 | 第43-44页 |
·菌株L1 和L2 16S rRNA 基因序列分析结果 | 第44-52页 |
·菌株L1 和L2 基因组DNA | 第44页 |
·16S rRNA 基因特异性扩增结果 | 第44-45页 |
·16S rRNA 基因的纯化 | 第45页 |
·菌株 L1 16S rRNA 基因序列分析结果 | 第45-49页 |
·菌株L2 16S rRNA 基因序列分析结果 | 第49-52页 |
·讨论 | 第52-54页 |
3. 高蛋白水解活力瑞士乳杆菌的筛选 | 第54-64页 |
·材料与方法 | 第54-57页 |
·材料 | 第54-55页 |
·菌株 | 第54页 |
·试剂 | 第54-55页 |
·仪器 | 第55页 |
·培养基 | 第55页 |
·方法 | 第55-57页 |
·菌株蛋白水解活性初步检测即平板筛选法(初筛) | 第55页 |
·菌株对酪蛋白溶液的水解作用(复筛) | 第55-56页 |
·菌株L. helveticus 9 的酪蛋白水解进程测定 | 第56页 |
·菌株L. helveticus 9 酪蛋白水解产物的分析鉴定 | 第56-57页 |
·统计分析 | 第57页 |
·结果与讨论 | 第57-62页 |
·蛋白水解酶产生菌的初步筛选结果 | 第57-58页 |
·菌株对酪蛋白溶液的水解作用(复筛)结果 | 第58-59页 |
·甘氨酸标准曲线 | 第58页 |
·多肽的标准曲线 | 第58页 |
·菌株酪蛋白水解溶液的水解度及多肽含量 | 第58-59页 |
·菌株L. helveticus 9 对酪蛋白水解作用 | 第59页 |
·L. helveticus 9 酪蛋白水解产物分析鉴定 | 第59-62页 |
·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第59-60页 |
·菌株L. helveticus 9 酪蛋白水解液凝胶层析图谱 | 第60-62页 |
·讨论 | 第62-63页 |
·小结 | 第63-64页 |
4. 瑞士乳杆菌水解酪蛋白发酵工艺的研究 | 第64-69页 |
·材料与方法 | 第64-66页 |
·材料 | 第64-65页 |
·菌株与培养 | 第64页 |
·试剂 | 第64页 |
·培养基 | 第64-65页 |
·仪器 | 第65页 |
·方法 | 第65-66页 |
·菌株Lactobacillus helveticus 9 酪蛋白水解工艺试验设计 | 第65页 |
·测试指标及分析方法 | 第65-66页 |
·统计分析 | 第66页 |
·结果与讨论 | 第66-68页 |
·结果 | 第66-67页 |
·菌株Lactobacillus helveticus 9 酪蛋白水解工艺的优化 | 第66-67页 |
·验证实验 | 第67页 |
·讨论 | 第67-68页 |
·小结 | 第68-69页 |
5. 酪蛋白水解物的制备及分离纯化 | 第69-80页 |
·材料与方法 | 第69-72页 |
·材料 | 第69-70页 |
·菌株 | 第69页 |
·试剂 | 第69-70页 |
·主要仪器设备 | 第70页 |
·方法 | 第70-72页 |
·L. helveticus 9 菌株酪蛋白水解产物的制备 | 第70页 |
·L. helveticus 9 菌株酪蛋白水解产物的超滤分离 | 第70页 |
·F3 组分SephadexG-25 凝胶过滤层析 | 第70-71页 |
·SephadexG-15 交联葡聚糖凝胶进一步分离 | 第71页 |
·SephadexG-15 交联葡聚糖凝胶分离谱峰的质谱鉴定 | 第71页 |
·SephadexG-15 交联葡聚糖凝胶目标谱峰的高速逆流色谱分离 | 第71-72页 |
·结果与讨论 | 第72-79页 |
·酪蛋白水解产物的超滤分离 | 第72页 |
·F3 组分SephadexG-25 凝胶过滤层析 | 第72-74页 |
·F3-1 和F3-2 组分SephadexG-15 层析 | 第74-75页 |
·SephadexG-15 分离谱峰的质谱鉴定 | 第75-78页 |
·F3-1-1 组分高速逆流色谱分离纯化结果 | 第78-79页 |
·小结 | 第79-80页 |
6. 酪蛋白水解产物体外抑制ACE 作用的研究 | 第80-88页 |
·材料与方法 | 第81-82页 |
·材料 | 第81页 |
·试剂 | 第81页 |
·仪器 | 第81页 |
·方法 | 第81-82页 |
·ACE 抑制活性的测定: | 第81-82页 |
·半抑制浓度( IC_(50)) 的测定 | 第82页 |
·ACE 抑制肽分子结构特征的鉴定 | 第82页 |
·结果 | 第82-86页 |
·超滤产物抑制ACE 活性的效果 | 第82-83页 |
·凝胶过滤分离产物抑制ACE 活性的效果 | 第83页 |
·凝胶过滤分离产物抑制ACE 活性的效果 | 第83-84页 |
·高速逆流色谱纯化产物抑制ACE 活性的效果 | 第84-85页 |
·组分F3-1-1-1Q-TOF-MS/MS 鉴定结果 | 第85-86页 |
·讨论 | 第86-87页 |
·小结 | 第87-88页 |
7. 酪蛋白水解产物体外抗氧化作用的研究 | 第88-101页 |
·材料与方法 | 第89-90页 |
·材料 | 第89页 |
·试剂 | 第89页 |
·仪器 | 第89页 |
·方法 | 第89-90页 |
·总的抗氧化能力的测定 | 第89页 |
·酪蛋白水解产物还原能力的测定 | 第89页 |
·酪蛋白水解产物清除羟自由基的测定 | 第89-90页 |
·酪蛋白水解产物清除DPPH 自由基能力的测定 | 第90页 |
·酪蛋白水解物对超氧阴离子自由基(O_2~(·-))清除能力的测定 | 第90页 |
·统计分析 | 第90页 |
·结果 | 第90-98页 |
·超滤产物抗氧化活性 | 第90-94页 |
·还原能力 | 第90-91页 |
·总抗氧化能力 | 第91-92页 |
·清除羟基自由基能力 | 第92-93页 |
·清除超氧自由基能力 | 第93-94页 |
·清除DPPH 自由基能力 | 第94页 |
·组分F3-1-1 和F3-1-2 清除自由基的能力 | 第94-96页 |
·清除DPPH 自由基能力 | 第95页 |
·清除羟基自由基能力 | 第95-96页 |
·清除超氧自由基能力 | 第96页 |
·高速逆流色谱分离纯化产物抗氧化作用 | 第96-97页 |
·组分F3-1-1-1 分子结构及氨基酸序列 | 第97-98页 |
·讨论 | 第98-100页 |
·小结 | 第100-101页 |
8. 酪蛋白水解产物调节肠细胞生长作用的研究 | 第101-114页 |
·材料与方法 | 第102-105页 |
·材料 | 第102页 |
·试剂 | 第102页 |
·仪器 | 第102页 |
·方法 | 第102-105页 |
·肠细胞(IEC-6 细胞、Caco-2 细胞)的培养 | 第102-103页 |
·测定酪蛋白水解产物对肠细胞生长的作用 | 第103-105页 |
·统计分析 | 第105页 |
·结果 | 第105-111页 |
·酪蛋白水解产物对肠细胞增殖的影响 | 第105-111页 |
·超滤产物(F1、F2 和F3)对肠细胞增殖的影响 | 第105-106页 |
·组分F3-1-1 和F3-1-2 对肠细胞增殖的影响 | 第106-107页 |
·细胞凋亡形态的观察 | 第107-108页 |
·TUNEL 试剂盒测定细胞凋亡的结果 | 第108-110页 |
·流式细胞仪测定肠细胞凋亡的结果 | 第110-111页 |
·讨论 | 第111-112页 |
·小结 | 第112-114页 |
9 结论与展望 | 第114-117页 |
·菌种的分离及鉴定 | 第114页 |
·高蛋白水解活力瑞士乳杆菌的筛选 | 第114页 |
·水解酪蛋白发酵工艺的优化 | 第114页 |
·酪蛋白水解物的制备及分离纯化 | 第114-115页 |
·酪蛋白水解产物抑制ACE 作用的研究 | 第115页 |
·酪蛋白水解产物抗氧化作用的研究 | 第115页 |
·蛋白水解产物调节肠细胞生长作用的研究 | 第115页 |
·本研究的创新点 | 第115-116页 |
·展望 | 第116-117页 |
参考文献 | 第117-128页 |
附录 | 第128-134页 |
个人简介 | 第134-135页 |
导师简介 | 第135-136页 |
获得成果目录清单 | 第136-137页 |
致谢 | 第137页 |