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瑞士乳杆菌酪蛋白源活性肽制备及其生理功效研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-15页
1. 酪蛋白源活性肽研究进展第15-39页
   ·乳蛋白生物活性肽的定义及种类第15-17页
   ·酪蛋白结构及其来源活性肽的种类及序列来源第17-30页
     ·酪蛋白结构第17页
     ·酪蛋白分类第17-18页
       ·α_s-酪蛋白第17页
       ·β-酪蛋白第17-18页
       ·κ-酪蛋白第18页
     ·牛乳酪蛋白的一级结构第18-19页
     ·酪蛋白源生物活性肽序列及功能第19-30页
       ·抗高血压肽第19-23页
       ·抗氧化肽第23-26页
       ·细胞生长调节肽第26-30页
       ·免疫调节肽第30页
       ·其它活性肽第30页
   ·利用乳蛋白制备生物活性肽的技术方法第30-32页
     ·获取乳蛋白生物活性肽采用的方法第30-32页
       ·酶解第31页
       ·微生物发酵法第31-32页
       ·化学合成法第32页
       ·采用基因工程技术第32页
   ·生物活性肽的分离纯化第32-33页
     ·超滤技术第32-33页
     ·离子交换色谱法第33页
     ·大小排阻层析和反相高压液相色谱第33页
     ·高速逆流色谱第33页
   ·乳源蛋白活性肽特定生理功效评价方式第33-34页
   ·技术应用前景第34-36页
   ·本论文主要研究目的意义及技术路线第36-39页
2 瑞士乳杆菌的分离、鉴定第39-54页
   ·材料与方法第39-42页
     ·材料第39页
     ·方法第39-42页
       ·培养基第39-41页
       ·培养及形态特征第41页
       ·生理特征测试第41页
       ·生化特性测试第41-42页
       ·16S rRNA 基因的序列分析第42页
     ·仪器设备第42页
   ·结果与分析第42-52页
     ·乳杆菌的形态特征第42-43页
     ·乳杆菌的生理生化鉴定结果第43-44页
     ·菌株L1 和L2 16S rRNA 基因序列分析结果第44-52页
       ·菌株L1 和L2 基因组DNA第44页
       ·16S rRNA 基因特异性扩增结果第44-45页
       ·16S rRNA 基因的纯化第45页
       ·菌株 L1 16S rRNA 基因序列分析结果第45-49页
       ·菌株L2 16S rRNA 基因序列分析结果第49-52页
   ·讨论第52-54页
3. 高蛋白水解活力瑞士乳杆菌的筛选第54-64页
   ·材料与方法第54-57页
     ·材料第54-55页
       ·菌株第54页
       ·试剂第54-55页
       ·仪器第55页
       ·培养基第55页
     ·方法第55-57页
       ·菌株蛋白水解活性初步检测即平板筛选法(初筛)第55页
       ·菌株对酪蛋白溶液的水解作用(复筛)第55-56页
       ·菌株L. helveticus 9 的酪蛋白水解进程测定第56页
       ·菌株L. helveticus 9 酪蛋白水解产物的分析鉴定第56-57页
     ·统计分析第57页
   ·结果与讨论第57-62页
     ·蛋白水解酶产生菌的初步筛选结果第57-58页
     ·菌株对酪蛋白溶液的水解作用(复筛)结果第58-59页
       ·甘氨酸标准曲线第58页
       ·多肽的标准曲线第58页
       ·菌株酪蛋白水解溶液的水解度及多肽含量第58-59页
     ·菌株L. helveticus 9 对酪蛋白水解作用第59页
     ·L. helveticus 9 酪蛋白水解产物分析鉴定第59-62页
       ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳第59-60页
       ·菌株L. helveticus 9 酪蛋白水解液凝胶层析图谱第60-62页
   ·讨论第62-63页
   ·小结第63-64页
4. 瑞士乳杆菌水解酪蛋白发酵工艺的研究第64-69页
   ·材料与方法第64-66页
     ·材料第64-65页
       ·菌株与培养第64页
       ·试剂第64页
       ·培养基第64-65页
     ·仪器第65页
     ·方法第65-66页
       ·菌株Lactobacillus helveticus 9 酪蛋白水解工艺试验设计第65页
       ·测试指标及分析方法第65-66页
     ·统计分析第66页
   ·结果与讨论第66-68页
     ·结果第66-67页
       ·菌株Lactobacillus helveticus 9 酪蛋白水解工艺的优化第66-67页
       ·验证实验第67页
     ·讨论第67-68页
   ·小结第68-69页
5. 酪蛋白水解物的制备及分离纯化第69-80页
   ·材料与方法第69-72页
     ·材料第69-70页
       ·菌株第69页
       ·试剂第69-70页
     ·主要仪器设备第70页
     ·方法第70-72页
       ·L. helveticus 9 菌株酪蛋白水解产物的制备第70页
       ·L. helveticus 9 菌株酪蛋白水解产物的超滤分离第70页
       ·F3 组分SephadexG-25 凝胶过滤层析第70-71页
       ·SephadexG-15 交联葡聚糖凝胶进一步分离第71页
       ·SephadexG-15 交联葡聚糖凝胶分离谱峰的质谱鉴定第71页
       ·SephadexG-15 交联葡聚糖凝胶目标谱峰的高速逆流色谱分离第71-72页
   ·结果与讨论第72-79页
     ·酪蛋白水解产物的超滤分离第72页
     ·F3 组分SephadexG-25 凝胶过滤层析第72-74页
     ·F3-1 和F3-2 组分SephadexG-15 层析第74-75页
     ·SephadexG-15 分离谱峰的质谱鉴定第75-78页
     ·F3-1-1 组分高速逆流色谱分离纯化结果第78-79页
   ·小结第79-80页
6. 酪蛋白水解产物体外抑制ACE 作用的研究第80-88页
   ·材料与方法第81-82页
     ·材料第81页
       ·试剂第81页
       ·仪器第81页
     ·方法第81-82页
       ·ACE 抑制活性的测定:第81-82页
       ·半抑制浓度( IC_(50)) 的测定第82页
       ·ACE 抑制肽分子结构特征的鉴定第82页
   ·结果第82-86页
     ·超滤产物抑制ACE 活性的效果第82-83页
     ·凝胶过滤分离产物抑制ACE 活性的效果第83页
     ·凝胶过滤分离产物抑制ACE 活性的效果第83-84页
     ·高速逆流色谱纯化产物抑制ACE 活性的效果第84-85页
     ·组分F3-1-1-1Q-TOF-MS/MS 鉴定结果第85-86页
   ·讨论第86-87页
   ·小结第87-88页
7. 酪蛋白水解产物体外抗氧化作用的研究第88-101页
   ·材料与方法第89-90页
     ·材料第89页
       ·试剂第89页
       ·仪器第89页
     ·方法第89-90页
       ·总的抗氧化能力的测定第89页
       ·酪蛋白水解产物还原能力的测定第89页
       ·酪蛋白水解产物清除羟自由基的测定第89-90页
       ·酪蛋白水解产物清除DPPH 自由基能力的测定第90页
       ·酪蛋白水解物对超氧阴离子自由基(O_2~(·-))清除能力的测定第90页
     ·统计分析第90页
   ·结果第90-98页
     ·超滤产物抗氧化活性第90-94页
       ·还原能力第90-91页
       ·总抗氧化能力第91-92页
       ·清除羟基自由基能力第92-93页
       ·清除超氧自由基能力第93-94页
       ·清除DPPH 自由基能力第94页
     ·组分F3-1-1 和F3-1-2 清除自由基的能力第94-96页
       ·清除DPPH 自由基能力第95页
       ·清除羟基自由基能力第95-96页
       ·清除超氧自由基能力第96页
     ·高速逆流色谱分离纯化产物抗氧化作用第96-97页
     ·组分F3-1-1-1 分子结构及氨基酸序列第97-98页
   ·讨论第98-100页
   ·小结第100-101页
8. 酪蛋白水解产物调节肠细胞生长作用的研究第101-114页
   ·材料与方法第102-105页
     ·材料第102页
       ·试剂第102页
       ·仪器第102页
     ·方法第102-105页
       ·肠细胞(IEC-6 细胞、Caco-2 细胞)的培养第102-103页
       ·测定酪蛋白水解产物对肠细胞生长的作用第103-105页
     ·统计分析第105页
   ·结果第105-111页
     ·酪蛋白水解产物对肠细胞增殖的影响第105-111页
       ·超滤产物(F1、F2 和F3)对肠细胞增殖的影响第105-106页
       ·组分F3-1-1 和F3-1-2 对肠细胞增殖的影响第106-107页
       ·细胞凋亡形态的观察第107-108页
       ·TUNEL 试剂盒测定细胞凋亡的结果第108-110页
       ·流式细胞仪测定肠细胞凋亡的结果第110-111页
   ·讨论第111-112页
   ·小结第112-114页
9 结论与展望第114-117页
   ·菌种的分离及鉴定第114页
   ·高蛋白水解活力瑞士乳杆菌的筛选第114页
   ·水解酪蛋白发酵工艺的优化第114页
   ·酪蛋白水解物的制备及分离纯化第114-115页
   ·酪蛋白水解产物抑制ACE 作用的研究第115页
   ·酪蛋白水解产物抗氧化作用的研究第115页
   ·蛋白水解产物调节肠细胞生长作用的研究第115页
   ·本研究的创新点第115-116页
   ·展望第116-117页
参考文献第117-128页
附录第128-134页
个人简介第134-135页
导师简介第135-136页
获得成果目录清单第136-137页
致谢第137页

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