| 缩略词表 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 材料与方法 | 第12-24页 |
| 1 材料及来源 | 第12-13页 |
| ·菌株和质粒 | 第12页 |
| ·实验动物 | 第12页 |
| ·主要试剂 | 第12页 |
| ·主要仪器设备 | 第12-13页 |
| ·细胞培养和转染 | 第13页 |
| 2 实验方法 | 第13-24页 |
| ·免疫组织化学染色 | 第13-14页 |
| ·PCR 扩增同源臂 | 第14-15页 |
| ·重组腺相关病毒的包装和感染 | 第15-16页 |
| ·靶细胞的感染及中靶细胞的筛选 | 第16页 |
| ·PCR 鉴定中靶细胞 | 第16-17页 |
| ·Western blot | 第17页 |
| ·Southern 印记杂交 | 第17-18页 |
| ·软琼脂克隆形成实验 | 第18-19页 |
| ·裸鼠成瘤实验 | 第19页 |
| ·细胞周期同步化 | 第19-20页 |
| ·流式细胞术分析细胞周期 | 第20页 |
| ·细胞迁移实验 | 第20-21页 |
| ·双向电泳蛋白质样品的制备 | 第21页 |
| ·双向电泳 | 第21-22页 |
| ·染色 | 第22页 |
| ·凝胶图像采集与分析 | 第22页 |
| ·电喷雾串联质谱(ESI-MS/MS)鉴定蛋白质 | 第22-24页 |
| 结果 | 第24-44页 |
| 1. Gankyrin 在人结肠癌组织中的表达情况 | 第24-26页 |
| 2. Gankyrin 基因敲除结肠癌细胞(HCT116 gankyrin~(-/-))的建立 | 第26-32页 |
| ·打靶载体的构建 | 第26-28页 |
| ·rAAV 介导的基因打靶以及阳性克隆的筛选鉴定 | 第28-30页 |
| ·抗性筛选元件的切除及Southern 鉴定 | 第30-32页 |
| 3. Gankyrin 敲除对结肠癌细胞转化和成瘤能力的影响 | 第32-33页 |
| 4. Gankyrin 敲除对结肠癌细胞生长速度和周期进程的影响 | 第33-38页 |
| ·HCT116 gankyrin~(-/-)细胞生长速度变缓 | 第33-34页 |
| ·HCT116 gankyrin~(-/-)细胞G1-S 期进程滞后 | 第34-36页 |
| ·HCT116 gankyrin~(-/-)细胞G2/M 期阻滞 | 第36-38页 |
| 5. Gankyrin 对细胞迁移能力的影响 | 第38-39页 |
| 6. HCT116 与HCT116 gankyrin~(-/-)细胞差异蛋白质组学比较 | 第39-44页 |
| ·HCT116 与HCT116 gankyrin~(-/-)细胞蛋白质差异图谱的建立 | 第39-41页 |
| ·差异蛋白质的质谱鉴定 | 第41-44页 |
| 讨论 | 第44-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 总结 | 第58-60页 |
| 文献综述 | 第60-74页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 个人简历 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
