| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-25页 |
| ·猪肺炎支原体基本特性 | 第14页 |
| ·猪气喘病 | 第14-16页 |
| ·猪肺炎支原体的致病机理 | 第14-15页 |
| ·猪气喘病流行病学特点 | 第15页 |
| ·猪气喘病血清学 | 第15-16页 |
| ·猪肺炎支原体主要免疫原蛋白 | 第16-18页 |
| ·猪肺炎支原体的黏附因子 | 第16页 |
| ·热休克蛋白 | 第16-17页 |
| ·P74蛋白 | 第17页 |
| ·Dnak | 第17页 |
| ·热休克蛋白Hsp60 | 第17页 |
| ·其他膜蛋白 | 第17-18页 |
| ·P46蛋白 | 第17-18页 |
| ·P65蛋白 | 第18页 |
| ·细胞质蛋白 | 第18页 |
| ·P36蛋白 | 第18页 |
| ·诊断方法研究现状 | 第18-21页 |
| ·临床诊断 | 第18-19页 |
| ·病原学诊断检测 | 第19-20页 |
| ·分离培养法 | 第19页 |
| ·染色法 | 第19页 |
| ·免疫印迹法 | 第19页 |
| ·核酸探针检测 | 第19页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第19-20页 |
| ·血清学抗体检测 | 第20-21页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第20页 |
| ·间接血凝实验(IHA) | 第20页 |
| ·补体结合实验(CFT) | 第20-21页 |
| ·放射免疫酶实验(RIDEA) | 第21页 |
| ·Mhp的防治 | 第21-23页 |
| ·国内常规疫苗概况 | 第21页 |
| ·基因工程疫苗 | 第21-23页 |
| ·黏附因子相关疫苗的研究 | 第21-22页 |
| ·核苷酸还原酶(NrdF)R2亚基重组疫苗 | 第22页 |
| ·表达文库免疫(Expression library immunization) | 第22页 |
| ·DNA疫苗 | 第22页 |
| ·肽疫苗 | 第22-23页 |
| ·抗猪肺支原体单克隆抗体的研究进展 | 第23-24页 |
| ·抗P36蛋白单抗 | 第23页 |
| ·抗P46蛋白单抗 | 第23页 |
| ·抗P74蛋白单抗 | 第23页 |
| ·抗P97蛋白单抗 | 第23页 |
| ·抗P65蛋白单抗 | 第23-24页 |
| ·研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-36页 |
| ·实验材料 | 第25-28页 |
| ·毒株、菌株与质粒 | 第25页 |
| ·动物与细胞 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·主要设备 | 第25-26页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第26-28页 |
| ·实验方法 | 第28-36页 |
| ·目的基因的克隆连接与鉴定 | 第28-31页 |
| ·引物设计与合成 | 第28页 |
| ·PCR反应及产物的纯化 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的双酶切与纯化 | 第29页 |
| ·表达载体pET-30a的双酶切与纯化 | 第29页 |
| ·表达载体与目的片段的链接、转化与鉴定 | 第29-30页 |
| ·质粒的提取及鉴定 | 第30-31页 |
| ·融合蛋白的诱导表达、纯化及SDS-PAGE电泳检测 | 第31-32页 |
| ·融合蛋白的诱导表达及SDS-PAGE电泳检测 | 第31页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第31页 |
| ·纯化蛋白的浓度测定及保存 | 第31-32页 |
| ·纯化蛋白免疫原性分析 | 第32页 |
| ·Balb/c小鼠免疫程序 | 第32页 |
| ·筛选方法(间接ELISA)的建立 | 第32-33页 |
| ·阳性血清的制备 | 第32页 |
| ·抗原包被最佳浓度与对照血清最佳稀释浓度的确定 | 第32-33页 |
| ·细胞融合 | 第33-34页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第33页 |
| ·SP2/0细胞的制备 | 第33页 |
| ·脾细胞的制备 | 第33页 |
| ·细胞融合 | 第33-34页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选及克隆化 | 第34页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第34页 |
| ·克隆及扩增(有限稀释法) | 第34页 |
| ·单克隆抗体腹水的制备 | 第34页 |
| ·单抗腹水的粗提 | 第34页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第34-35页 |
| ·细胞冻存 | 第34-35页 |
| ·细胞复苏 | 第35页 |
| ·单克隆抗体特性的鉴定 | 第35-36页 |
| ·抗体亚类的测定 | 第35页 |
| ·杂交瘤细胞培养上清及腹水效价的测定 | 第35页 |
| ·单克隆抗体的特异性鉴定 | 第35页 |
| ·杂交瘤细胞株抗体分泌稳定性的测定 | 第35页 |
| ·相加ELISA | 第35-36页 |
| 第三章 实验结果 | 第36-46页 |
| ·目的基因的克隆连接与鉴定 | 第36-38页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第36页 |
| ·质粒鉴定结果 | 第36-38页 |
| ·质粒双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·质粒PCR鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白SDS-PAGE分析 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白30a-DnakC-P97C SDS-PAGE分析 | 第38页 |
| ·重组蛋白30a-P97C SDS-PAGE分析 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白的纯化及浓度测定 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白浓度的测定 | 第40页 |
| ·重组蛋白免疫原性分析 | 第40页 |
| ·重组蛋白30a-P97C包被ELISA方法最佳工作条件的建立 | 第40-41页 |
| ·动物抗体水平检测 | 第41-42页 |
| ·融合细胞筛选 | 第42页 |
| ·细胞融合率与阳性率的计算 | 第42页 |
| ·单克隆抗体的筛选与单克隆杂交瘤细胞株的建立 | 第42页 |
| ·抗体亚类鉴定结果 | 第42页 |
| ·单克隆抗体特性的鉴定结果 | 第42-46页 |
| ·单克隆抗体ELISA效价 | 第42-43页 |
| ·ELISA检测两株单抗与重组蛋白28a-P970的反应性 | 第43页 |
| ·单抗的Western-blot分析 | 第43-45页 |
| ·单克隆抗体的稳定性及抗原表位分析 | 第45-46页 |
| 第四章 讨论 | 第46-50页 |
| ·单抗抗原的选择 | 第46页 |
| ·基因C端的选择 | 第46页 |
| ·筛选系统的建立 | 第46-47页 |
| ·单克隆抗体制备过程中的注意事项 | 第47-50页 |
| ·免疫抗原 | 第47页 |
| ·细胞融合 | 第47-48页 |
| ·饲养细胞的准备 | 第47页 |
| ·骨髓瘤细胞的选择和培养 | 第47页 |
| ·融合 | 第47-48页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化和冻存 | 第48页 |
| ·单克隆抗体的生产和效价测定 | 第48-50页 |
| 第五章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
