| 目录 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-37页 |
| ·影响昆虫病原真菌稳定性的环境因素 | 第18-19页 |
| ·温度 | 第18页 |
| ·湿度 | 第18-19页 |
| ·紫外线 | 第19页 |
| ·昆虫病原真菌的抗逆分子基础研究进展 | 第19-21页 |
| ·色素 | 第19-20页 |
| ·多元糖醇 | 第20-21页 |
| ·影响昆虫病原真菌抗逆性的其它因素 | 第21页 |
| ·昆虫病原真菌的侵染与致病机理 | 第21-28页 |
| ·昆虫病原真菌孢子对昆虫体壁的附着 | 第22-24页 |
| ·孢子萌发与侵染结构的形成 | 第24-25页 |
| ·穿透与致病过程 | 第25-27页 |
| ·昆虫病原真菌与寄主的互作 | 第27-28页 |
| ·磷酸酶 | 第28-30页 |
| ·磷酸酶与病原细菌的致病性 | 第28-29页 |
| ·磷酸酶与病原真菌对寄主的附着 | 第29页 |
| ·磷酸酶与信号传导途径 | 第29页 |
| ·昆虫病原真菌中的磷酸酶 | 第29-30页 |
| ·疏水蛋白(Hydrophobins)与排斥蛋白(Repellents) | 第30-34页 |
| ·疏水蛋白与真菌气生结构的形成和发育 | 第32-33页 |
| ·疏水蛋白介导的对疏水表面的附着 | 第33页 |
| ·疏水蛋白与病原真菌的致病性 | 第33页 |
| ·排斥蛋白以及疏水蛋白在生物功能上关系 | 第33-34页 |
| ·T-DNA随机插入突变在功能基因研究中应用 | 第34-35页 |
| ·小结 | 第35-37页 |
| 第二部分 引言 | 第37-39页 |
| ·立题依据 | 第37-38页 |
| ·技术路线 | 第38-39页 |
| 第三部分 T-DNA突变体的获得及相关基因的克隆与分析 | 第39-55页 |
| ·材料 | 第39-41页 |
| ·菌株与载体 | 第39-40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·主要仪器设备 | 第40页 |
| ·主要缓冲液配方 | 第40-41页 |
| ·主要培养基配方 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-46页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备与转化 | 第41-42页 |
| ·载体构建 | 第42页 |
| ·农杆菌感受态制备与转化 | 第42-43页 |
| ·突变体库构建 | 第43页 |
| ·突变体的产孢量分析 | 第43页 |
| ·真菌DNA和RNA的提取 | 第43-44页 |
| ·Southern杂交 | 第44-45页 |
| ·突变体212相关基因的克隆 | 第45-46页 |
| ·3′-RACE | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-51页 |
| ·突变体212表型分析 | 第46页 |
| ·突变体212的拷贝数分析 | 第46-47页 |
| ·突变体212相关基因的克隆与分析 | 第47-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·突变库的构建方法 | 第51-52页 |
| ·T-DNA在受体基因组中的插入特点 | 第52页 |
| ·T-DNA边界的完整性 | 第52页 |
| ·小结 | 第52-55页 |
| 第四部分 BbAPL的表达与定位 | 第55-69页 |
| ·材料 | 第55-57页 |
| ·菌株与载体 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·主要仪器设备 | 第55页 |
| ·主要试剂与缓冲液配方 | 第55-56页 |
| ·主要培养基配方 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57-60页 |
| ·真菌DNA和RNA的提取 | 第57页 |
| ·BbAPL的表达分析 | 第57页 |
| ·载体构建 | 第57页 |
| ·BbAPL在毕赤酵母中的表达 | 第57-58页 |
| ·磷酸酶活性测定 | 第58-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-67页 |
| ·BbAPL在毕赤酵母中表达的载体构建 | 第60页 |
| ·酵母转化子的筛选与PCR验证 | 第60-61页 |
| ·BbAPL在酵母中的表达与活性检测 | 第61-62页 |
| ·pH值对BbAPL活性的影响 | 第62-63页 |
| ·BbAPL∷eGFP融合载体构建 | 第63-65页 |
| ·BbAPL在球孢白僵菌中的定位 | 第65-66页 |
| ·BbAPL表达特征分析 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-68页 |
| ·BbAPL在球孢白僵菌中的表达与定位 | 第67页 |
| ·BbAPL在酵母中的异源表达 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| ·BbAPL在球孢白僵菌中的表达与定位 | 第68页 |
| ·BbAPL在酵母中的异源表达及活性检测 | 第68-69页 |
| 第五部分 BbAPL的功能研究 | 第69-93页 |
| ·材料 | 第69页 |
| ·菌株与载体 | 第69页 |
| ·主要试剂 | 第69页 |
| ·主要仪器设备 | 第69页 |
| ·主要试剂与缓冲液配方 | 第69页 |
| ·主要培养基配方 | 第69页 |
| ·方法 | 第69-72页 |
| ·载体构建 | 第69页 |
| ·DNA提取 | 第69-70页 |
| ·Southern杂交 | 第70页 |
| ·菌株与分生孢子对高温和高渗敏感性测定 | 第70页 |
| ·生物量与产孢量测定 | 第70-71页 |
| ·气生菌丝形成与穿透 | 第71页 |
| ·菌丝与分生孢子的疏水性检测 | 第71页 |
| ·菌丝与分生孢子对疏水表面的附着性检测 | 第71-72页 |
| ·菌丝融合观察 | 第72页 |
| ·对无机磷胁迫的反应 | 第72页 |
| ·对桃蚜的毒力测定 | 第72页 |
| ·结果与分析 | 第72-88页 |
| ·载体构建 | 第72-74页 |
| ·BbAPL同源重组突变体的筛选与分子验证 | 第74-76页 |
| ·BbAPL不影响菌株的抗逆性 | 第76-78页 |
| ·BbAPL敲除导致球孢白僵菌气生菌丝生长贫瘠 | 第78-79页 |
| ·BbAPL敲除影响了菌株生物量与产孢量 | 第79-81页 |
| ·BbAPL敲除影响气生菌丝的形成和发育 | 第81页 |
| ·BbAPL敲除导致气生菌丝和分生孢子的疏水性下降 | 第81页 |
| ·BbAPL敲除影响气生菌丝与分生孢子对疏水表面的附着性 | 第81-86页 |
| ·BbAPL敲除促进气生菌丝出现融合 | 第86页 |
| ·BbAPL敲除影响菌株对无机磷的敏感性 | 第86页 |
| ·BbAPL对球孢白僵菌毒力的影响 | 第86-88页 |
| ·讨论 | 第88-91页 |
| ·基于同源重组方法的选择 | 第88页 |
| ·磷酸酶与真菌对寄主的附着 | 第88页 |
| ·昆虫病原真菌对寄主体壁的附着 | 第88-89页 |
| ·昆虫病原真菌中的磷酸酶 | 第89页 |
| ·丝状真菌气生菌丝的形成与发育 | 第89-90页 |
| ·丝状真菌气生菌丝的融合 | 第90-91页 |
| ·小结 | 第91-93页 |
| ·BbAPL的缺失导致菌落气生菌丝较瘠薄,产孢量和生物量显著下降 | 第91页 |
| ·BbAPL影响气生菌丝与分生孢子的疏水性以及对疏水表面的附着性 | 第91页 |
| ·BbAPL影响球孢白僵菌气生菌丝的形成和发育 | 第91页 |
| ·BbAPL影响对无机磷浓度变化的敏感性,但不影响菌株的抗逆性和毒力 | 第91-93页 |
| 第六部分 结论 | 第93-95页 |
| ·主要结论 | 第93-94页 |
| ·球孢白僵菌T-DNA随机插入突变体的筛选 | 第93页 |
| ·BbAPL基因克隆与序列分析 | 第93页 |
| ·BbAPL在球孢白僵菌中的表达与定位 | 第93页 |
| ·BbAPL在酵母中的表达及酶学特征 | 第93-94页 |
| ·BbAPL的功能分析 | 第94页 |
| ·本研究的创新之处 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-109页 |
| 附录 | 第109-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
