| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1.前言 | 第12-27页 |
| ·水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的研究概况 | 第12-16页 |
| ·病害症状 | 第13-14页 |
| ·RSV基因组结构及功能 | 第14-16页 |
| ·酵母双杂交系统及应用 | 第16-20页 |
| ·酵母双杂交系统简介 | 第16-17页 |
| ·酵母双杂交系统的应用研究 | 第17页 |
| ·利用酵母双杂交研究植物—病原物的互作 | 第17-20页 |
| ·植物蛋白与病毒复制酶类蛋白之间的相互作用 | 第18页 |
| ·植物蛋白与病毒运动蛋白之间的相互作用 | 第18-19页 |
| ·植物蛋白与病毒外壳蛋白之间的相互作用 | 第19页 |
| ·植物蛋白与病毒其他蛋白之间的相互作用 | 第19-20页 |
| ·免疫共沉淀技术及应用 | 第20-22页 |
| ·免疫共沉淀技术简介 | 第20-21页 |
| ·免疫共沉淀技术的应用 | 第21-22页 |
| ·荧光定量PCR技术及应用 | 第22-26页 |
| ·荧光定量PCR简介 | 第22-24页 |
| ·实时荧光定量PCR荧光探针及应用 | 第24-26页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 2.免疫共沉淀技术在筛选水稻蛋白中的探索应用 | 第27-35页 |
| ·材料和方法 | 第27-31页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·供试毒源、昆虫 | 第27页 |
| ·供试水稻品种 | 第27页 |
| ·多克隆抗体、病毒 | 第27页 |
| ·试剂及仪器 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-31页 |
| ·水稻愈伤组织的培养 | 第27-28页 |
| ·水稻悬浮细胞体系的建立 | 第28页 |
| ·水稻悬浮细胞活力测定 | 第28页 |
| ·水稻悬浮细胞密度测定 | 第28页 |
| ·RSV接种水稻悬浮细胞 | 第28-29页 |
| ·荧光抗体染色统计病毒侵染悬浮细胞的百分比 | 第29页 |
| ·免疫共沉淀筛选细胞蛋白 | 第29-30页 |
| ·SDS-PAGE | 第30页 |
| ·银染 | 第30页 |
| ·常用获毒及传毒方法 | 第30-31页 |
| ·水稻蛋白提取 | 第31页 |
| ·免疫共沉淀筛选水稻蛋白 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-33页 |
| ·愈伤组织的获得 | 第31-32页 |
| ·水稻悬浮细胞的获得 | 第32页 |
| ·水稻悬浮细胞活性测定 | 第32-33页 |
| ·免疫共沉淀筛选水稻蛋白 | 第33页 |
| ·小结与讨论 | 第33-35页 |
| 3.利用酵母双杂交系统对互作蛋白再验证 | 第35-47页 |
| ·材料和方法 | 第35-42页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·菌株和质粒 | 第35页 |
| ·PCR引物 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-42页 |
| ·水稻叶片总RNA的提取 | 第36页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·NB8、NB9目的基因片段的纯化 | 第37-38页 |
| ·PCR扩增产物和pMD18-T克隆载体的连接 | 第38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞转化 | 第38页 |
| ·重组克隆的PCR筛选 | 第38-39页 |
| ·NB8和NB9基因酵母双杂交载体的构建 | 第39-40页 |
| ·两质粒共转化酵母细胞 | 第40-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-45页 |
| ·NB8、NB9基因的扩增和克隆 | 第42-43页 |
| ·NB8、NB9基因酵母双杂交载体的构建 | 第43页 |
| ·NSvc4和NB8、NB9两蛋白之间的互作检测 | 第43-45页 |
| ·小结与讨论 | 第45-47页 |
| 4.利用免疫共沉淀技术验证NSvc4与NB8、NB9的互作 | 第47-56页 |
| ·材料与方法 | 第47-52页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·菌株和质粒 | 第47页 |
| ·PCR引物 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-52页 |
| ·目的基因的扩增和克隆 | 第47-48页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞制备 | 第48页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞转化 | 第48页 |
| ·含有重组质粒单菌落农杆菌鉴定 | 第48-49页 |
| ·植物表达载体在烟草中的瞬时表达 | 第49-50页 |
| ·外源蛋白在烟草中表达情况的检测 | 第50页 |
| ·植物蛋白提取 | 第50-51页 |
| ·免疫共沉淀 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第51页 |
| ·Western blot鉴定 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-54页 |
| ·目的基因的获取和克隆 | 第52-53页 |
| ·植物瞬时表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·蛋白互作情况的检测 | 第54页 |
| ·小结与讨论 | 第54-56页 |
| 5.利用荧光定量PCR技术检测NB8、NB9 mRNA表达情况 | 第56-66页 |
| ·材料与方法 | 第56-58页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·供试材料 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-58页 |
| ·荧光定量PCR引物的设计 | 第56-57页 |
| ·RNA的抽提和质量检测 | 第57页 |
| ·cDNA的合成 | 第57页 |
| ·目的基因和内参基因标准曲线的建立 | 第57-58页 |
| ·荧光定量PCR检测不同样品中目的基因的表达量 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-64页 |
| ·样品总RNA的质量检测 | 第58-59页 |
| ·目的基因和内参基因的融解曲线 | 第59-60页 |
| ·目的基因和内参基因的扩增曲线 | 第60-61页 |
| ·目的基因和内参基因的标准曲线 | 第61-62页 |
| ·目的基因和内参基因的原始定量 | 第62-63页 |
| ·目的基因的相对定量 | 第63-64页 |
| ·小结和讨论 | 第64-66页 |
| 6.展望 | 第66-67页 |
| 总结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-78页 |
| 附录一 | 第78-80页 |
| 附录二 | 第80-83页 |
| 附录三 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
