RGD-拖丝蛋白基因的构建及其在毕赤酵母中的分泌表达
| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-29页 |
| ·课题背景 | 第9页 |
| ·蜘蛛丝的研究进展 | 第9-18页 |
| ·蜘蛛丝的来源 | 第9-10页 |
| ·蜘蛛丝的组成与结构 | 第10-13页 |
| ·蜘蛛丝的性能 | 第13-14页 |
| ·蜘蛛丝的人工合成研究 | 第14-17页 |
| ·蜘蛛丝的应用前景 | 第17-18页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第18-28页 |
| ·毕赤酵母的表达菌株 | 第19-20页 |
| ·毕赤酵母的表达载体 | 第20-21页 |
| ·外源基因的转化与整合 | 第21-22页 |
| ·高拷贝转化菌株的筛选 | 第22-23页 |
| ·外源蛋白的翻译后修饰 | 第23-24页 |
| ·影响外源基因表达的因素及其优化策略 | 第24-27页 |
| ·毕赤酵母表达重组蛛丝蛋白 | 第27-28页 |
| ·研究的主要内容、目的与意义 | 第28-29页 |
| ·主要内容 | 第28页 |
| ·目的 | 第28页 |
| ·意义 | 第28-29页 |
| 第2章 材料与方法 | 第29-43页 |
| ·材料 | 第29-32页 |
| ·菌株与载体 | 第29页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第29页 |
| ·主要药品 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·培养基及常用溶液 | 第30-32页 |
| ·方法 | 第32-43页 |
| ·蛛丝蛋白基因单体的设计与寡核苷酸片断的合成 | 第32-33页 |
| ·蛛丝蛋白基因单体的获得、鉴定与克隆 | 第33-37页 |
| ·RGD-蛛丝蛋白基因单体的多聚化 | 第37页 |
| ·RGD-蛛丝蛋白基因多聚体重组表达质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·含RGD-蛛丝蛋白基因的毕赤酵母重组菌的构建 | 第38-40页 |
| ·毕赤酵母重组菌的分泌表达 | 第40-43页 |
| 第3章 结果与分析 | 第43-55页 |
| ·RGD-蛛丝蛋白基因单体的构建 | 第43页 |
| ·RGD-蛛丝蛋白基因单体的克隆 | 第43-45页 |
| ·RGD-蛛丝蛋白基因多聚体的构建 | 第45-46页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第46-48页 |
| ·毕赤酵母重组菌的构建 | 第48-53页 |
| ·重组表达载体的线性化 | 第48-49页 |
| ·线性化重组表达载体的电击转化 | 第49-50页 |
| ·多拷贝插入毕赤酵母重组菌的筛选 | 第50-51页 |
| ·多拷贝插入毕赤酵母重组菌的PCR鉴定 | 第51-53页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE的检测 | 第53-55页 |
| 第4章 讨论 | 第55-59页 |
| ·蛛丝蛋白基因单体的设计 | 第55-56页 |
| ·蛛丝蛋白基因单体的合成与克隆 | 第56页 |
| ·蛛丝蛋白基因单体的多聚化与重组表达载体的构建 | 第56-57页 |
| ·电击转化与整合 | 第57页 |
| ·重组拖丝蛋白的分泌表达 | 第57-59页 |
| ·拖丝蛋白多聚体基因的结构 | 第57页 |
| ·整合位点的影响 | 第57-58页 |
| ·多聚体基因拷贝数的影响 | 第58页 |
| ·表达产物的检测 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-61页 |
| 附录 | 第61-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
