| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-26页 |
| ·微生物细胞表面展示技术研究进展 | 第12-20页 |
| ·微生物细胞表面展示技术简介 | 第12-13页 |
| ·运载蛋白 | 第13页 |
| ·乘客蛋白 | 第13页 |
| ·微生物细胞表面展示体系的种类 | 第13-17页 |
| ·G~-细菌表面展示体系 | 第13-16页 |
| ·G~+细菌表面展示体系 | 第16页 |
| ·酵母菌表面展示体系 | 第16-17页 |
| ·微生物细胞表面展示技术的应用现状 | 第17-20页 |
| ·开发重组的活细胞疫苗 | 第17-18页 |
| ·多肽文库的表面展示和筛选 | 第18页 |
| ·全细胞催化剂 | 第18页 |
| ·全细胞吸附剂 | 第18-20页 |
| ·利用假单胞菌冰核蛋白作为运载蛋白的细胞表面展示体系 | 第20-23页 |
| ·冰核活性蛋白(Ice Nucleation Protein) | 第20-21页 |
| ·已克隆的冰核蛋白基因 | 第21页 |
| ·冰核蛋白在细胞表面展示方面的应用 | 第21-23页 |
| ·抗原或抗体的表面展示 | 第22页 |
| ·工业酶类展示 | 第22页 |
| ·多肽文库的筛选 | 第22页 |
| ·重金属螯合剂展示 | 第22-23页 |
| ·金属硫蛋白研究进展 | 第23-25页 |
| ·金属硫蛋白简介 | 第23页 |
| ·金属硫蛋白的种类 | 第23-24页 |
| ·真核细胞金属硫蛋白 | 第23页 |
| ·原核细胞金属硫蛋白 | 第23-24页 |
| ·金属硫蛋白的应用现状 | 第24-25页 |
| ·研究目的和意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-35页 |
| ·实验材料 | 第26-31页 |
| ·菌株 | 第26-27页 |
| ·质粒 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·PCR反应的引物 | 第28-29页 |
| ·试剂和仪器 | 第29-31页 |
| ·质粒和总DNA提取、质粒转化时所用到的试剂 | 第29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE电泳所需试剂 | 第29-30页 |
| ·Western-blot所用试剂 | 第30页 |
| ·GFP荧光强度检测所需试剂 | 第30页 |
| ·重金属吸附实验所需试剂 | 第30页 |
| ·酶切、酶连、PCR和DNA回收所需试剂 | 第30页 |
| ·仪器 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·大肠杆菌和恶臭假单胞菌质粒DNA的提取 | 第31页 |
| ·恶臭假单胞菌的总DNA的提取 | 第31页 |
| ·DNA电泳分析 | 第31页 |
| ·DNA片断的回收 | 第31页 |
| ·PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌的常规转化 | 第32页 |
| ·恶臭假单胞菌的电转化 | 第32页 |
| ·绿色荧光蛋白(GFP)荧光强度的检测 | 第32页 |
| ·SDS-PAGE电泳以及Western-blot分析 | 第32-33页 |
| ·菌体总蛋白的样品制备 | 第32页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的制备 | 第32-33页 |
| ·电泳、染色及脱色 | 第33页 |
| ·Western-blot分析 | 第33页 |
| ·质粒稳定性分析 | 第33页 |
| ·恶臭假单胞菌细胞分级分离 | 第33-34页 |
| ·重金属吸附实验 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-62页 |
| ·恶臭假单胞菌表达载体的构建及功能鉴定 | 第35-42页 |
| ·大肠杆菌—假单胞菌穿梭表达载体pYMB03质粒的构建 | 第35-37页 |
| ·重组质粒pYMBP的构建 | 第37-38页 |
| ·pYMBP质粒电转化入恶臭假单胞菌AB92019 | 第38页 |
| ·表达载体pYMB03的表达性能及其分析 | 第38-42页 |
| ·在恶臭假单胞菌中的表达及其影响因素 | 第38-42页 |
| ·表达载体pYMB03在恶臭假单胞菌中的稳定性 | 第42页 |
| ·在大肠杆菌中的表达 | 第42页 |
| ·恶臭假单胞菌表面展示载体的构建及功能鉴定 | 第42-51页 |
| ·含融合基因inaK-n/gfp的重组质粒pYNP的构建 | 第42-46页 |
| ·pYNP质粒电转化入恶臭假单胞菌AB92019 | 第46页 |
| ·融合蛋白InaK-N/GFP在重组菌的表达及表面活性 | 第46-51页 |
| ·融合蛋白InaK-N/GFP在重组菌的表达性能 | 第46-49页 |
| ·融合蛋白InaK-N/GFP在重组菌的表面活性测定 | 第49-51页 |
| ·金属硫蛋白的表面展示 | 第51-62页 |
| ·串连多拷贝smtA基因的表面展示载体的构建 | 第51-58页 |
| ·重组质粒电转化恶臭假单胞菌AB92019 | 第58页 |
| ·融合蛋白InaK-N/(SMTA)n在重组菌的表面表达 | 第58页 |
| ·重组菌对游离重金属的吸附试验 | 第58-60页 |
| ·重组菌对游离重金属的耐受性试验 | 第60-62页 |
| 4 小结和讨论 | 第62-64页 |
| ·小结 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-74页 |
| 附录 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
