| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一部分 引言 | 第11-17页 |
| ·抗生素的研究现状 | 第11-12页 |
| ·红霉素及其应用前景 | 第12页 |
| ·红霉素生物合成的分子生物学 | 第12-15页 |
| ·红霉素基因工程研究进展 | 第15页 |
| ·研究内容及意义 | 第15-17页 |
| 第二部分 构建多基因串联共表达载体 | 第17-29页 |
| ·实验材料 | 第17-19页 |
| ·菌株、质粒 | 第18页 |
| ·工具酶及主要生化试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·主要溶液配制 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-24页 |
| ·引物设计 | 第19-20页 |
| ·目的片段扩增 | 第20页 |
| ·片段的置换 | 第20-21页 |
| ·测序 | 第21页 |
| ·常规实验操作 | 第21-24页 |
| ·实验结果 | 第24-26页 |
| ·目的片段的获取 | 第24-25页 |
| ·构建pET-m22b | 第25-26页 |
| ·构建pET-m28a | 第26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| ·小结 | 第28-29页 |
| 第三部分 在大肠杆菌中构建红霉素大环内酯环合成通路 | 第29-45页 |
| ·实验材料 | 第29-33页 |
| ·菌株、质粒 | 第30页 |
| ·工具酶及主要生化试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·主要溶液配制 | 第30-33页 |
| ·研究中应用的基因 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-39页 |
| ·菌种的复苏 | 第33页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·引物设计 | 第34页 |
| ·目的基因的扩增 | 第34页 |
| ·单基因质粒的构建 | 第34-35页 |
| ·单基因的表达鉴定 | 第35页 |
| ·多基因的串联组合 | 第35-36页 |
| ·多基因的共表达鉴定 | 第36页 |
| ·常规实验操作 | 第36-39页 |
| ·实验结果 | 第39-42页 |
| ·基因组DNA提取结果 | 第39页 |
| ·PCR结果 | 第39-40页 |
| ·单基因质粒鉴定结果 | 第40页 |
| ·单基因表达鉴定结果 | 第40页 |
| ·多基因串联组合结果 | 第40-41页 |
| ·多基因共表达鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-45页 |
| 第四部分 在大肠杆菌中合成红霉素大环内酯环 | 第45-51页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·菌株、质粒 | 第45页 |
| ·工具酶及主要生化试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45-46页 |
| ·主要溶液配 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-47页 |
| ·低温诱导合成6dEB | 第46页 |
| ·产物的粗提 | 第46-47页 |
| ·质谱检测 | 第47页 |
| ·常规实验操作 | 第47页 |
| ·实验结果 | 第47-48页 |
| ·SDS-PAGE检测蛋白表达结果 | 第47页 |
| ·质谱检测结果 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-51页 |
| 第五部分 在大肠杆菌中构建红霉素大环内酯环糖基化通路 | 第51-69页 |
| ·实验材料 | 第51-54页 |
| ·菌株、质粒 | 第51-52页 |
| ·工具酶及主要生化试剂 | 第52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·主要溶液配制 | 第52-54页 |
| ·研究中应用的基因 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-59页 |
| ·菌种的复苏 | 第54页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第54页 |
| ·引物设计 | 第54页 |
| ·目的基因的扩增 | 第54-56页 |
| ·单基因重组质粒的构建 | 第56页 |
| ·单基因的表达鉴定 | 第56页 |
| ·多基因的串联组合 | 第56-58页 |
| ·多基因的共表达鉴定 | 第58页 |
| ·常规实验操 | 第58-59页 |
| ·实验结果 | 第59-66页 |
| ·基因组DNA提取结果 | 第59页 |
| ·PCR结果 | 第59-60页 |
| ·单基因重组质粒酶切鉴定结果 | 第60-62页 |
| ·单基因表达鉴定结果 | 第62-64页 |
| ·多基因串联组合结果 | 第64页 |
| ·多基因共表达鉴定结果 | 第64-66页 |
| ·讨论 | 第66页 |
| ·小结 | 第66-69页 |
| 第六部分 在大肠杆菌中进行红霉素大环内酯环后修饰 | 第69-75页 |
| ·实验材料 | 第69-70页 |
| ·菌株、质粒 | 第69页 |
| ·工具酶及主要生化试剂 | 第69页 |
| ·主要仪器 | 第69-70页 |
| ·主要溶液配制 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-71页 |
| ·构建表达菌株 | 第70页 |
| ·低温诱导合成6dEryD | 第70-71页 |
| ·产物的粗提 | 第71页 |
| ·质谱检测 | 第71页 |
| ·常规实验操作 | 第71页 |
| ·实验结果 | 第71-73页 |
| ·SDS-PAGE检测蛋白表达结果 | 第71-72页 |
| ·质谱检测结果 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73页 |
| ·小结 | 第73-75页 |
| 结论 | 第75-77页 |
| 1.本研究主要获得的结果 | 第75页 |
| 2.本论文的创新之处 | 第75-76页 |
| 3.需要进一步研究的问题 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 附录 | 第81-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 攻读硕士期间研究成果 | 第89页 |