| 缩写词汇表 | 第1-8页 |
| 图表清单 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-23页 |
| 1 异硫氰酸盐的研究进展 | 第14-18页 |
| ·异硫氰酸盐的前体物质—硫代葡萄糖苷 | 第14-15页 |
| ·异硫氰酸盐的生理功能 | 第15-17页 |
| ·异硫氰酸盐防癌抗癌作用 | 第15-16页 |
| ·异硫氰酸盐的抗菌防腐作用 | 第16-17页 |
| ·异硫氰酸盐的抗氧化作用 | 第17页 |
| ·异硫氰酸盐的合成与代谢 | 第17-18页 |
| 2 黑芥子酶的研究进展 | 第18-22页 |
| ·黑芥子酶的分布 | 第18页 |
| ·黑芥子酶的结构和性质 | 第18-20页 |
| ·黑芥子酶的生物活性及其影响因素 | 第20页 |
| ·黑芥子酶的分离纯化 | 第20-21页 |
| ·黑芥子酶活性测定方法 | 第21页 |
| ·黑芥子酶基因的克隆 | 第21页 |
| ·黑芥子酶的应用 | 第21-22页 |
| 3 本研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 第2章 芥蓝黑芥子酶基因全长cDNA的克隆及其原核表达 | 第23-55页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-41页 |
| ·总RNA的提取和检测 | 第24-26页 |
| ·准备工作 | 第24-25页 |
| ·RNA抽提 | 第25页 |
| ·总RNA质量的检测 | 第25-26页 |
| ·目的基因保守区域的获得 | 第26-30页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第26-27页 |
| ·目的基因保守区域的PCR | 第27页 |
| ·目的片段的回收 | 第27-28页 |
| ·回收目的片段的连接 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法) | 第28页 |
| ·连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第28-29页 |
| ·PCR鉴定目的基因及测序 | 第29-30页 |
| ·3’-RACE获得目的基因的3’端 | 第30-32页 |
| ·第一链cDNA的获得 | 第30页 |
| ·3’-RACE的PCR | 第30-32页 |
| ·5’-RACE获得目的基因的5’端 | 第32-34页 |
| ·第一链cDNA的获得 | 第32页 |
| ·第一链cDNA的纯化 | 第32页 |
| ·纯化的cDNA加尾 | 第32页 |
| ·目的基因的5’末端的PCR扩增 | 第32-34页 |
| ·目的基因编码序列(ORF)的扩增 | 第34-35页 |
| ·原核表达载体pET-myr的构建 | 第35-39页 |
| ·pET-28a质粒的抽提 | 第35-36页 |
| ·pET-28a质粒的双酶切及载体大片段的回收纯化 | 第36-37页 |
| ·目的基因与pET-28a载体大片段的连接 | 第37-38页 |
| ·重组质粒pET-myr的酶切鉴定 | 第38页 |
| ·重组质粒转化BL21感受态细胞 | 第38页 |
| ·重组质粒的再次鉴定 | 第38-39页 |
| ·诱导表达 | 第39页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第39-41页 |
| ·试剂的制备 | 第39-40页 |
| ·表达蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-52页 |
| ·RNA抽提 | 第41-42页 |
| · | 第42-51页 |
| ·RT-PCR | 第42页 |
| ·3’-RACE PCR扩增 | 第42-43页 |
| ·5’-RACE PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·编码序列的扩增 | 第44-46页 |
| ·芥蓝黑芥子酶的生物信息学分析 | 第46-51页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第51页 |
| ·目的基因的原核表达 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| ·材料的选择 | 第52页 |
| ·黑芥子酶基因 | 第52-53页 |
| ·原核表达 | 第53页 |
| 5 小结 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 附录1 | 第62页 |
| 附录2 | 第62-63页 |