| 目录 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一部分 前言 | 第11-23页 |
| 1. nm23-H1/NDPK-A研究概况 | 第11-12页 |
| 2. 核苷二磷酸激酶活性研究概述 | 第12-17页 |
| ·NDPK-A的肿瘤抑制活性 | 第12页 |
| ·NDPK-A磷酸基转移酶活性 | 第12-14页 |
| ·NDPK-A的DNase酶活性 | 第14-17页 |
| ·NDPK-A的其它生物学活性 | 第17页 |
| 3. NDPK-A结构与功能研究 | 第17-20页 |
| 4. NDPK-A的应用研究 | 第20页 |
| ·化疗药物增敏剂 | 第20页 |
| ·抗病毒药物增敏剂 | 第20页 |
| ·肿瘤标志物 | 第20页 |
| ·药靶研究 | 第20页 |
| 5. 本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 6. 本研究的创新点 | 第21-22页 |
| 7. 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第23-44页 |
| 一、实验材料 | 第23-27页 |
| 1. 菌种与质粒 | 第23页 |
| 2. 主要试剂 | 第23-24页 |
| 3. 培养基和溶液 | 第24-25页 |
| 4. 主要仪器设备 | 第25-27页 |
| 二、方法 | 第27-44页 |
| 1. 利用PCR方法构建突变型nm23-H1基因 | 第27-34页 |
| ·实验流程图 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-34页 |
| 2. NDPK-A异构体的表达与纯化 | 第34-37页 |
| ·技术路线 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-37页 |
| 3. MALDI-TOF质谱分析 | 第37-38页 |
| ·样品制备 | 第37-38页 |
| ·质谱分析 | 第38页 |
| 4. 还原、非还原电泳分析 | 第38页 |
| ·样品制备 | 第38页 |
| ·电泳分析 | 第38页 |
| 5. HPLC法测定NDPK-A异构体的磷酸转移酶活性研究 | 第38-40页 |
| ·试剂与仪器 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-40页 |
| 6. NDPK-A及其异构体Dnase酶活性研究 | 第40-41页 |
| ·NDPK-A的Dnase酶活性评价方法的建立 | 第40-41页 |
| ·NDPK-A及异构体Dnase酶活性差异 | 第41页 |
| 7. NDPK-A及其异构体的抑癌活性研究 | 第41-42页 |
| ·NDPK-A蛋白样品的稀释 | 第41页 |
| ·96孔板培养细胞 | 第41页 |
| ·MTT法测定 | 第41-42页 |
| 8. NM23-H1突变基因真核表达质粒的构建 | 第42-44页 |
| 第三部分 结果 | 第44-61页 |
| 1. NM23-H1突变基因表达质粒的构建 | 第44-45页 |
| ·酶切鉴定结果 | 第44页 |
| ·测序鉴定结果 | 第44-45页 |
| 2. NDPK-A异构体蛋白纯化 | 第45-48页 |
| ·诱导表达曲线 | 第45-46页 |
| ·NDPK-A异构体蛋白纯化 | 第46-48页 |
| 3. 质谱结果 | 第48-53页 |
| ·野生型NDPK-A与突变蛋白NDPK-A C4S关键肽段PMF图谱对比 | 第49-50页 |
| ·野生型NDPK-A与突变蛋白NDPK-A C4S关键肽段PMF图谱对比 | 第50-52页 |
| ·野生型NDPK-A与突变蛋白NDPK-A C145S关键肽段PMF图谱对比 | 第52-53页 |
| 4. 还原型、非还原型电泳结果 | 第53-54页 |
| 5. NDPK-A及其异构体的磷酸基转移酶测定和比较 | 第54-58页 |
| ·NDPK-A异构体酶活性测定时底物和产物的洗脱曲线 | 第54-56页 |
| ·数据统计与计算 | 第56-58页 |
| 6. NDPK-A及其异构体的DNase酶活性测定和比较 | 第58-60页 |
| ·NDPK-A的Dnase酶活性评价方法的建立 | 第58-59页 |
| ·NDPK-及异构体Dnase酶活性差异 | 第59-60页 |
| 7. NDPK-A及异构体对K562细胞增殖能力影响 | 第60-61页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第61-68页 |
| 一、讨论 | 第61-66页 |
| 1. nm23-H1突变型基因的构建 | 第61-62页 |
| 2. NDPK-A异构体表达、纯化及电泳分析 | 第62-63页 |
| 3. 肽指纹图谱验证基因突变 | 第63-64页 |
| 4. NDPK-A的磷酸基转移酶活性 | 第64-65页 |
| 5. 建立评价NDPK-A的DNA剪切酶活性方法及DNase酶差异 | 第65-66页 |
| 6. NDPK-A异构体体的抑制癌活性 | 第66页 |
| 二、展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 附录 | 第73-77页 |
| 硕士期间发表论文 | 第77页 |
| 经费资助 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
