| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 目录 | 第9页 |
| 第一章 前言 | 第9-16页 |
| ·1,3-丙二醇的工业用途 | 第9-10页 |
| ·微生物发酵生产1,3-PD | 第10-13页 |
| ·Lactobacillus collinoides二醇脱水酶及其激活因子的研究意义 | 第13-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-25页 |
| ·材料 | 第16-17页 |
| ·菌株与质粒 | 第16页 |
| ·酶与试剂 | 第16页 |
| ·主要仪器设备 | 第16-17页 |
| ·方法与步骤 | 第17-25页 |
| ·L.collinoides的培养 | 第17页 |
| ·菌种的保存 | 第17页 |
| ·L.collinoides基因组DNA的制备 | 第17-18页 |
| ·pduCDE基因与pduGH基因的引物设计和PCR扩增 | 第18-19页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第19页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第19-20页 |
| ·DNA的酶切与连接 | 第20页 |
| ·连接产物化学转化大肠杆菌感受态细胞 | 第20页 |
| ·阳性克隆的筛选和酶切验证 | 第20-21页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第21页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第21页 |
| ·pduGH达产物(包涵体)的溶解和复性 | 第21-22页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第22页 |
| ·pduGH日表达产物(包涵体)的纯化 | 第22-23页 |
| ·L.collinoides二醇脱水酶和激活因子活力的检测 | 第23-25页 |
| 第三章 结果与分析 | 第25-34页 |
| ·L.collinoides基因组总DNA的制备 | 第25页 |
| ·L.collinoides二醇脱水酶基因(pduCDE)的克隆表达 | 第25-29页 |
| ·二醇脱水酶基因(pduCDE)表达质粒的构建 | 第25-27页 |
| ·pduCDE基因的序列分析 | 第27页 |
| ·pduCDE基因表达产物的SDS-PAGE分析 | 第27-28页 |
| ·重组菌中二醇脱水酶活力的测定 | 第28-29页 |
| ·L.collinoides二醇脱水酶激活因子(pduGH)的克隆表达 | 第29-32页 |
| ·表达质粒pET-pduGH的构建 | 第29-30页 |
| ·pduGH基因的序列分析 | 第30页 |
| ·pduGH基因表达产物的SDS-PAGE分析 | 第30-32页 |
| ·包涵体的复性效果分析 | 第32页 |
| ·pduGH基因表达产物的酶功能检验 | 第32-34页 |
| 第四章 讨论 | 第34-39页 |
| ·L.collinoides二醇脱水酶 | 第34-35页 |
| ·L.collinoides二醇脱水酶激活因子 | 第35-38页 |
| ·pduGH表达产物形成包涵体复性 | 第38-39页 |
| 第五章 结论 | 第39-41页 |
| ·结论 | 第39页 |
| ·展望 | 第39-41页 |
| 参考文献 | 第41-49页 |
| 附录 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第56页 |
