| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 绪论 | 第8-20页 |
| ·课题背景 | 第8-14页 |
| ·金属硫蛋白定义 | 第9页 |
| ·金属硫蛋白的结构 | 第9-10页 |
| ·植物金属硫蛋白 | 第10-11页 |
| ·植物金属硫蛋白的结构 | 第11页 |
| ·植物金属硫蛋白主要功能 | 第11-12页 |
| ·植物对重金属的解毒 | 第12-14页 |
| ·植物基因工程的研究方法 | 第14-17页 |
| ·植物转基因技术 | 第14-16页 |
| ·转化植株的筛选及检测方法 | 第16-17页 |
| ·本文涉及的内容 | 第17-18页 |
| ·目的基因BjMT-2 | 第17-18页 |
| ·模式植物烟草 | 第18页 |
| ·研究的目的与意义 | 第18-20页 |
| 2 金属硫蛋白(MT)基因转化烟草的研究 | 第20-37页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第20-24页 |
| ·BjMT-2基因的克隆 | 第20页 |
| ·质粒pBinar的消化与回收 | 第20-21页 |
| ·BjMT-2基因与pBinar载体连接 | 第21页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第21页 |
| ·电转化大肠杆菌 | 第21-22页 |
| ·产物的PCR鉴定 | 第22-23页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第23页 |
| ·表达载体转化根癌农杆菌 | 第23页 |
| ·表达载体PCR鉴定 | 第23-24页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第24-29页 |
| ·材料和试剂 | 第24-25页 |
| ·转化步骤 | 第25-28页 |
| ·转基因植株的获得 | 第28-29页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第29-35页 |
| ·转基因植物的筛选培养 | 第29-30页 |
| ·烟草叶片总 DNA的提取及纯化 | 第30页 |
| ·转基因植物的 PCR检测 | 第30-32页 |
| ·烟草叶片的总 RNA的提取 | 第32页 |
| ·转基因植物的 Northern blot检测 | 第32-35页 |
| ·本章小结 | 第35-37页 |
| 3 金属硫蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及抗体制备 | 第37-49页 |
| ·材料和试剂 | 第37页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建 | 第37-46页 |
| ·BjMT-2基因的克隆及pQE-BjMT-2的构建 | 第37-40页 |
| ·pQE-2BjMT-2的构建 | 第40-43页 |
| ·表达及纯化金属硫蛋白双聚体蛋白 | 第43-46页 |
| ·转基因植物的Western blot检测 | 第46-48页 |
| ·植物可溶性总蛋白提取 | 第46页 |
| ·SDS-PAGE电泳分离蛋白质 | 第46-47页 |
| ·Western blot | 第47-48页 |
| ·本章小结 | 第48-49页 |
| 4 转金属硫蛋白植株的分析测定 | 第49-57页 |
| ·谷胱甘肽含量的测定 | 第49-53页 |
| ·谷胱甘肽标准曲线的制定方法 | 第50-51页 |
| ·烟草叶片古胱甘肽(GSH)的检测方法 | 第51-52页 |
| ·谷胱甘肽含量 | 第52-53页 |
| ·叶绿素含量测定 | 第53页 |
| ·DMSO方法测定含量 | 第53页 |
| ·叶绿素含量 | 第53页 |
| ·转基因烟草ATPase活性的测定 | 第53-55页 |
| ·材料及试剂 | 第53-54页 |
| ·ATPase活性的测定 | 第54-55页 |
| ·转基因植物的形态特征 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-68页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |