| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 符号说明 | 第8-9页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-19页 |
| 1 目的和意义 | 第9-10页 |
| 2.生物技术在黄瓜育种中应用及黄瓜霜霉病的研究现状 | 第10-16页 |
| ·分子标记技术 | 第10-14页 |
| ·黄瓜基因的分子标记 | 第10-12页 |
| 2 1.2 黄瓜遗传图谱的构建 | 第12页 |
| ·黄瓜组织培养技术 | 第12-13页 |
| ·黄瓜基因的克隆与表达 | 第13-14页 |
| ·遗传转化体系建立及基因工程改良 | 第14页 |
| ·黄瓜霜霉病的研究现状 | 第14-16页 |
| ·黄瓜霜霉病的抗性遗传研究 | 第15页 |
| ·黄瓜抗病害基因工程育种的应用前景 | 第15-16页 |
| 3.eR基因—氨基转移酶基因 | 第16页 |
| 4.光特异性表达启动子PNZIP调控的植物高效表达载体 | 第16-18页 |
| ·组成型启动子 | 第17页 |
| ·组织特异性启动子 | 第17-18页 |
| 5 本试验的主要研究内容 | 第18-19页 |
| 第二部分 研究工作 | 第19-47页 |
| 一.材料与方法 | 第19-31页 |
| 1.试验材料与地点 | 第19-21页 |
| ·试剂 | 第19页 |
| ·载体与菌株 | 第19页 |
| ·植物材料 | 第19页 |
| ·软件工具 | 第19页 |
| ·试验地点 | 第19页 |
| ·培养基和常用溶液 | 第19-21页 |
| 2.常规方法 | 第21-25页 |
| ·基因组DNA、质粒DNA、RNA的提取方法 | 第21-22页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒DNA | 第21页 |
| ·CTAB法提取转基因植株叶片DNA | 第21-22页 |
| ·TRIOL法提取叶片总RNA | 第22页 |
| ·DNA重组过程所涉及的实验方法 | 第22-25页 |
| ·限制性内切酶酶切质粒 | 第22-23页 |
| ·DNA粘性末端的平滑化 | 第23页 |
| ·载体大片段5’端脱磷 | 第23-24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及目的片段的回收 | 第24页 |
| ·载体片段和目的片段的连接 | 第24-25页 |
| ·CaCl_2法制备E.coli感受态细胞 | 第25页 |
| ·热击法转化E.coli DH10B | 第25页 |
| 3.氨基转移酶基因At2的克隆及表达载体构建 | 第25-29页 |
| ·At2基因的克隆 | 第25-28页 |
| ·PNZIP启动子的克隆和通用植物表达载体PPN的构建 | 第28-29页 |
| ·PNZIP启动子的克隆 | 第28页 |
| ·PPN植物通用表达载体构建 | 第28-29页 |
| 4 氨基转移酶At2基因表达载体PPN-At2的构建 | 第29-30页 |
| 5.At2基因对黄瓜遗传转化及转基因植株检测 | 第30-31页 |
| ·花粉管通道技术将基因导入黄瓜 | 第30页 |
| ·转At2基因T_0代黄瓜植株的抗性筛选与分子检测 | 第30-31页 |
| 二.结果与分析 | 第31-44页 |
| 1.At2基因的克隆 | 第31-35页 |
| ·RT-PCR扩增At2基因 | 第31页 |
| ·目的片段与T载体连接及重组子鉴定 | 第31-33页 |
| ·测序结果 | 第33-35页 |
| 2.PNZIP启动子的克隆与表达载体的构建 | 第35-41页 |
| ·PCR扩增PNZIP启动子 | 第35-36页 |
| ·目的片段与T载体连接及重组子鉴定 | 第36页 |
| ·测序结果 | 第36页 |
| ·PPN表达载体构建及检测 | 第36-39页 |
| ·PPN-At2表达载体构建及检测 | 第39-41页 |
| 3.黄瓜的遗传转化 | 第41-43页 |
| ·At2基因转入黄瓜及KN霉素抗性筛选 | 第41-42页 |
| ·At2基因转化黄瓜T_0代PCR检测 | 第42-43页 |
| 4 小结 | 第43-44页 |
| 三.讨论 | 第44-47页 |
| 1.关于氨基转移酶基因 | 第44页 |
| 2.关于植物高效表达载体 | 第44-45页 |
| ·植物高效表达载体的构建 | 第44页 |
| ·关于提高目的基因与载体过程中连接效率的措施 | 第44-45页 |
| 3.关于抗性选择标记 | 第45页 |
| 4 关于黄瓜的遗传转化 | 第45-47页 |
| 附表1 黄瓜、甜瓜基因组At2基因的克隆 | 第47-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 个人简历 | 第60页 |
