| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 符号说明 | 第6-10页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| ·纤维素的降解 | 第10-12页 |
| ·纤维素的存在及利用前景 | 第10页 |
| ·纤维素的结构特征及存在形式 | 第10-12页 |
| ·纤维素的降解及其现状 | 第12页 |
| ·纤维素酶 | 第12-16页 |
| ·纤维素酶的分类 | 第12-14页 |
| ·纤维素酶的催化机理 | 第14-15页 |
| ·产纤维素酶的种属及动物内源性纤维素酶 | 第15-16页 |
| ·纤维素酶的应用现状及前景 | 第16-17页 |
| ·本研究的内容 | 第17-19页 |
| ·已有的研究基础 | 第17-18页 |
| ·本研究内容摘要 | 第18-19页 |
| 2 利用杆状病毒载体系统在昆虫细胞T115 中表达多功能纤维素酶EGXA 基因 | 第19-29页 |
| ·材料和方法 | 第20页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20页 |
| ·仪器和耗材 | 第20页 |
| ·表达细胞株的构建 | 第20-24页 |
| ·重组转运质粒pFastBac~(TM)1-egxa 的构建 | 第20-22页 |
| ·重组病毒子Bacmid-egxa 的构建 | 第22-23页 |
| ·重组表达细胞株的构建 | 第23-24页 |
| ·重组EGXA 的表达与纯化 | 第24-25页 |
| ·感染昆虫细胞并表达纤维素酶基因egxa | 第24页 |
| ·目的蛋白的收集与纯化 | 第24-25页 |
| ·蛋白质浓度及分子量的测定 | 第25页 |
| ·对-硝基酚纤维二糖苷(pNPC)水解活性测定 | 第25页 |
| ·结果 | 第25-28页 |
| ·重组病毒子 | 第25-26页 |
| ·病斑试验结果 | 第26页 |
| ·重组EGXA 表达情况监测 | 第26-27页 |
| ·重组EGXA 的纯化、分子量及表达量 | 第27-28页 |
| ·小结与讨论 | 第28-29页 |
| 3 重组纤维素酶EGXA 的特征及酶学性质研究 | 第29-39页 |
| ·材料与方法 | 第29-30页 |
| ·重组EGXA 的催化活性测定 | 第30页 |
| ·对-硝基酚纤维二糖苷(pNPC)水解活性测定 | 第30页 |
| ·羧甲基纤维素钠(CMC-Na)水解活力测定 | 第30页 |
| ·微晶纤维素(sigmacell)水解活力测定 | 第30页 |
| ·其它水解活力测定 | 第30页 |
| ·糖蛋白鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组 EGXA 对大分子纤维素底物的结合实验 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-37页 |
| ·重组EGXA 的底物特异性 | 第31-32页 |
| ·温度对重组EGXA 催化活性的影响 | 第32-33页 |
| ·反应体系酸碱性对重组EGXA 催化活性的影响 | 第33-34页 |
| ·温度对重组EGXA 稳定性的影响 | 第34-35页 |
| ·溶液pH 值对重组EGXA 稳定性的影响 | 第35页 |
| ·糖基化检测 | 第35-36页 |
| ·重组 EGXA 对微晶纤维素sigmacell 的吸附 | 第36-37页 |
| ·小结与讨论 | 第37-39页 |
| 4 EGXA 的结构域在昆虫细胞中的表达及其性质分析 | 第39-47页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第39-40页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39-40页 |
| ·仪器和耗材 | 第40页 |
| ·表达细胞株的构建 | 第40-42页 |
| ·重组转运质粒pFastBac~(TM)1-cbm-a 和pFastBac~(TM)1-cd-a 的构建 | 第40-42页 |
| ·重组病毒子Bacmid-cbm-a 和bacmid-cd-a 的构建 | 第42页 |
| ·重组表达细胞株的构建 | 第42页 |
| ·重组CBM-A 和CD-A 的表达与纯化 | 第42-43页 |
| ·昆虫细胞T115 悬浮培养驯化 | 第42-43页 |
| ·重组杆状病毒感染昆虫细胞并表达目的蛋白 | 第43页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第43页 |
| ·结合结构域性质分析 | 第43页 |
| ·催化结构域性质分析 | 第43-44页 |
| ·结果 | 第44-45页 |
| ·结合结构域的表达与纯化 | 第44页 |
| ·结合结构域性质分析 | 第44-45页 |
| ·催化结构域的重组表达与性质分析 | 第45页 |
| ·小结与讨论 | 第45-47页 |
| 5 结论与展望 | 第47-48页 |
| ·结论 | 第47页 |
| ·展望 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53-55页 |
| 1 EGXA 的结合结构域与CBM 4_9 家族的氨基酸序列比对 | 第53-54页 |
| 2 EGXA 催化结构域与糖苷水解酶第10 家族氨基酸序列比对 | 第54-55页 |
| 3 糖苷水解酶第10 家族蛋白质三维结构示意 | 第55页 |
| 4 硕士期间发表的文章 | 第55页 |
