人干扰素-β在生菜中的表达、鉴定和生物活性研究
| 中文摘要 | 第1-14页 |
| 英文摘要 | 第14-17页 |
| 1 前言 | 第17-38页 |
| ·蛋白的异源表达途径 | 第17-20页 |
| ·微生物表达体系 | 第17-19页 |
| ·动物表达体系 | 第19-20页 |
| ·植物生物反应器的应用 | 第20-29页 |
| ·植物生物反应器的类型 | 第20-23页 |
| ·植物根系或悬浮细胞表达 | 第20-21页 |
| ·植物稳定表达 | 第21-22页 |
| ·植物瞬时表达 | 第22-23页 |
| ·适宜宿主的选择 | 第23-25页 |
| ·叶片类 | 第23页 |
| ·果实类与蔬菜类 | 第23-24页 |
| ·谷物类及豆类种子 | 第24页 |
| ·纤维及油料作物 | 第24-25页 |
| ·植物生物反应器来源的重组药物蛋白 | 第25-29页 |
| ·细胞因子、激素和生长因子 | 第25-26页 |
| ·抗体 | 第26-27页 |
| ·疫苗 | 第27-28页 |
| ·酶 | 第28-29页 |
| ·植物生物反应器的优点、限制因素及表达策略 | 第29-35页 |
| ·优点 | 第29-30页 |
| ·限制因素 | 第30-32页 |
| ·表达策略 | 第32-35页 |
| ·细胞器定位表达 | 第32-34页 |
| ·顺式表达元件的改造 | 第34页 |
| ·融合表达 | 第34-35页 |
| ·干扰素－β的应用 | 第35-37页 |
| ·干扰素的特点及其分类 | 第35页 |
| ·干扰素-β的分子结构和理化性质 | 第35-36页 |
| ·干扰素－β的生物学作用 | 第36页 |
| ·干扰素-β的生产现状和发展前景 | 第36-37页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第37-38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-51页 |
| ·实验材料 | 第38-39页 |
| ·植物材料 | 第38页 |
| ·菌株与质粒 | 第38-39页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第39页 |
| ·实验用的引物 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-51页 |
| ·生菜组织培养和再生 | 第39-40页 |
| ·生菜无菌苗的培养 | 第40页 |
| ·外植体的不定芽诱导 | 第40页 |
| ·不定芽的生根诱导 | 第40页 |
| ·卡那霉素敏感性试验 | 第40页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第40-43页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第40-42页 |
| ·目的基因片段的克隆 | 第42页 |
| ·DNA 片段的回收 | 第42-43页 |
| ·DNA 片段与表达载体的连接 | 第43页 |
| ·重组表达载体的转化 | 第43-45页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态的制备 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌细胞的质粒转化 | 第44页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第44页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第44-45页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第45页 |
| ·菌落PCR | 第45页 |
| ·重组表达载体的酶切鉴定 | 第45页 |
| ·重组表达载体的序列测定 | 第45页 |
| ·农杆菌介导的瞬时转化 | 第45-46页 |
| ·GUS 检测 | 第46-47页 |
| ·GUS 活性的组织化学分析 | 第46页 |
| ·GUS 基因表达的定量分析 | 第46-47页 |
| ·转基因检测 | 第47-50页 |
| ·植物基因组总DNA 的提取 | 第48页 |
| ·植物基因组DNA 的纯化 | 第48页 |
| ·PCR 检测 | 第48页 |
| ·目的蛋白的提取和纯化 | 第48-49页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第49-50页 |
| ·蛋白印迹检测（Western） | 第50页 |
| ·干扰素－β的抗病毒活性检测 | 第50-51页 |
| ·试验设计与数据分析 | 第51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-69页 |
| ·生菜瞬时表达体系的建立 | 第51-55页 |
| ·不同因素的重要性分析及处理组合的择优 | 第52-53页 |
| ·不同因素对瞬时表达水平的影响 | 第53-55页 |
| ·优化组合的验证 | 第55页 |
| ·生菜组织培养及植株再生体系的建立 | 第55-60页 |
| ·不同激素配比对不定芽诱导的影响 | 第55-57页 |
| ·不同基因型和外植体类型对不定芽诱导的影响 | 第57-58页 |
| ·不同激素配比对生根的影响 | 第58-59页 |
| ·卡那霉素敏感性测定 | 第59-60页 |
| ·干扰素－β在生菜中的瞬时表达分析 | 第60-66页 |
| ·干扰素－β基因的扩增及克隆 | 第60页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第60-63页 |
| ·菌体PCR 检测 | 第61-62页 |
| ·质粒PCR 检测 | 第62页 |
| ·酶切验证 | 第62-63页 |
| ·测序验证 | 第63页 |
| ·转基因生菜的PCR 检测 | 第63-64页 |
| ·干扰素－β在生菜叶片中的瞬时表达检测 | 第64页 |
| ·信号肽和碱基改变对干扰素－β表达量的影响 | 第64-65页 |
| ·瞬时表达干扰素－β的生物活性测定 | 第65-66页 |
| ·PNGase F 对干扰素－β的作用 | 第66-67页 |
| ·GUS－干扰素β的融合基因构建 | 第67-69页 |
| ·GUS 片段和IFN 片段的获得 | 第68页 |
| ·融合片段的获得 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-73页 |
| ·瞬时表达方法在转基因植物中的应用价值 | 第69页 |
| ·影响生菜瞬时表达的因素 | 第69-70页 |
| ·影响生菜组织培养和植株再生的因素 | 第70-71页 |
| ·干扰素-β在生菜中的高效表达 | 第71-72页 |
| ·进一步的研究设想 | 第72-73页 |
| 5 结论 | 第73-75页 |
| 6 参考文献 | 第75-93页 |
| 7 附录 | 第93-97页 |
| 8 致谢 | 第97-98页 |
| 9 攻读学位期间发表论文情况 | 第98页 |
