枯草芽孢杆菌C-36内切葡聚糖酶基因在巨大芽孢杆菌中的表达
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 前言 | 第8页 |
| 1 芽孢杆菌表达系统的研究进展 | 第8-16页 |
| ·芽孢杆菌基因表达的一般特点 | 第9-12页 |
| ·转录 | 第9-11页 |
| ·翻译 | 第11-12页 |
| ·载体 | 第12-14页 |
| ·自主复制质粒载体 | 第12-13页 |
| ·整合质粒 | 第13页 |
| ·噬菌体 | 第13-14页 |
| ·外源蛋白的分泌表达 | 第14-15页 |
| ·信号肽和信号肽酶 | 第14-15页 |
| ·蛋白质的分泌表达 | 第15页 |
| ·巨大芽孢杆菌——高效分泌外源蛋白的宿主 | 第15-16页 |
| ·存在问题和发展方向 | 第16页 |
| 2 本研究的目的及意义 | 第16-17页 |
| 3 材料与方法 | 第17-30页 |
| ·材料与试剂 | 第17-19页 |
| ·菌株及载体 | 第17-18页 |
| ·分子生物学试剂 | 第18页 |
| ·主要药品 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18-19页 |
| ·抗生素及溶菌酶贮存液 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·常用缓冲液及其配制 | 第19-22页 |
| ·试验方法 | 第22-30页 |
| ·引物的设计 | 第22页 |
| ·目的DNA片段的获得 | 第22-23页 |
| ·目的DNA片段的克隆 | 第23-24页 |
| ·表达载体的扩增 | 第24-25页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·重组表达质粒在巨大芽孢杆菌中的转化及表达 | 第26-27页 |
| ·纤维素酶活力测定 | 第27-28页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第28-29页 |
| ·内切葡聚糖酶基因工程菌培养条件的初步研究 | 第29-30页 |
| ·基因工程菌pHBM-End酶学性质研究 | 第30页 |
| 4 结果分析 | 第30-42页 |
| ·引物的设计 | 第30-31页 |
| ·目的DNA片段的获得 | 第31页 |
| ·目的DNA片段的克隆 | 第31-32页 |
| ·表达载体的扩增 | 第32页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第32-34页 |
| ·重组表达质粒在巨大芽孢杆菌中的转化及表达 | 第34-36页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第36页 |
| ·内切葡聚糖酶基因工程菌培养条件的初步研究 | 第36-40页 |
| ·基因工程菌pHBM-End酶学性质研究 | 第40-42页 |
| 5 讨论 | 第42-46页 |
| ·信号肽对外源基因表达的影响 | 第43页 |
| ·培养条件对外源基因表达的影响 | 第43-44页 |
| ·外源基因及宿主菌对基因表达的影响 | 第44-45页 |
| ·工程菌pHBM-End的酶学性质 | 第45-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 攻读硕士学位期间参与发表的文章 | 第52页 |
