| 致谢 | 第1-3页 |
| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-9页 |
| 第一部分 钩端螺旋体homoserine O-acetyltransferase(HTA)的结构解析与催化机理研究 | 第9-54页 |
| 第一章：背景知识 | 第10-20页 |
| ·HTA在Methionine合成途径中的位置 | 第10-11页 |
| ·几类已知结构的转乙酰酶 | 第11-16页 |
| ·丝氨酸乙酰转移酶 | 第11-13页 |
| ·组氨酸乙酰转移酶 | 第13-14页 |
| ·胆碱乙酰转移酶 | 第14-15页 |
| ·肉毒碱乙酰转移酶 | 第15-16页 |
| ·a／β水解酶超家族 | 第16-18页 |
| ·HTA研究进展 | 第18-19页 |
| ·本课题的意义 | 第19-20页 |
| 第二章：质粒构建,蛋白表达和纯化 | 第20-24页 |
| ·HTA质粒构建 | 第20-21页 |
| ·LiHTA蛋白表达 | 第21页 |
| ·Native的LiHTA蛋白表达 | 第21页 |
| ·硒代LiHTA蛋白表达 | 第21页 |
| ·经典的硒代蛋白表达方法 | 第21页 |
| ·简化的硒代蛋白表达方法 | 第21页 |
| ·HTA蛋白纯化 | 第21-24页 |
| ·菌体破碎 | 第21-22页 |
| ·DEAE-Sephadex阴离子交换柱层析 | 第22页 |
| ·Superdex G75分子筛层析 | 第22-24页 |
| 第三章 LiHTA转乙酰基的活性测定 | 第24-27页 |
| ·酶活测定方法 | 第24页 |
| ·试验结果及讨论 | 第24-27页 |
| ·LiHTA纯化过程中的酶活测定 | 第24-25页 |
| ·LiHTA对底物的Km值 | 第25页 |
| ·LiHTA的失活 | 第25-26页 |
| ·保护剂对LiHTA酶活的作用 | 第26-27页 |
| 第四章：晶体生长、数据收集和结构解析 | 第27-31页 |
| ·晶体生长 | 第27页 |
| ·数据收集 | 第27页 |
| ·结构解析 | 第27-29页 |
| ·数据分析 | 第28页 |
| ·寻找硒原子的位置 | 第28-29页 |
| ·相位解析 | 第29页 |
| ·模型搭建 | 第29页 |
| ·自动建模 | 第29页 |
| ·手动建模 | 第29页 |
| ·结构修正 | 第29-30页 |
| ·模型质量分析 | 第30-31页 |
| 第五章：结构与功能结果分析 | 第31-42页 |
| ·LiHTA整体结构 | 第31-32页 |
| ·HTA家族的系统进化树 | 第32-38页 |
| ·HTA家族的序列保守性 | 第38页 |
| ·LiHTA催化位点 | 第38-39页 |
| ·催化三联体中的H344和S153处于双构象 | 第39-42页 |
| 第六章：结构与功能结果讨论 | 第42-48页 |
| ·aL4的disorder与LiHTA在溶液中的单体状态相关 | 第42-44页 |
| ·推测LiHTA的催化机理 | 第44-46页 |
| ·尚未解决的问题 | 第46-48页 |
| ·底物特异性 | 第46-47页 |
| ·中间态和催化机理 | 第47-48页 |
| 参考文献(1) | 第48-54页 |
| 第二部分 人的Coactosin-like Protein(CLP)结构解析 | 第54-95页 |
| 第一章 前言 | 第55-64页 |
| ·肌动蛋白结合蛋白 | 第55-61页 |
| ·ADF-H结构域 | 第61-62页 |
| ·CLP介绍 | 第62-64页 |
| 第二章：基因克隆、表达和蛋白纯化 | 第64-71页 |
| ·试剂 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-68页 |
| ·hCLP基因的PCR扩增 | 第64页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第64页 |
| ·pMD 18-T-hCLP的构建 | 第64页 |
| ·pMD 18-T-hCLP阳性克隆的筛选 | 第64-65页 |
| ·重组蛋白在pET22b(+)载体中的表达 | 第65-66页 |
| ·重组蛋白的表达纯化 | 第66-68页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第68页 |
| ·质谱分析 | 第68页 |
| ·结果和讨论 | 第68-71页 |
| ·基因克隆和表达载体的构建 | 第68页 |
| ·hCLP的纯化 | 第68-69页 |
| ·浓度测定 | 第69页 |
| ·质谱分析 | 第69-71页 |
| 第三章：晶体生长 | 第71-73页 |
| 第四章：数据收集、结构解析和模型修正 | 第73-80页 |
| ·数据收集 | 第73-74页 |
| ·结构解析 | 第74-77页 |
| ·分子置换法 | 第74页 |
| ·多波长反常散射法 | 第74-76页 |
| ·分子置换法解其它两套数据的结构 | 第76-77页 |
| ·模型修正 | 第77-78页 |
| ·2.8(?)的MAD数据修正 | 第77-78页 |
| ·高分辨率数据的修正 | 第78页 |
| ·模型质量分析 | 第78-80页 |
| 第五章：hCLP结构解析的结果和讨论 | 第80-87页 |
| ·hCLP整体结构 | 第80页 |
| ·三个hCLP的结构比较和晶体堆积分析 | 第80-81页 |
| ·所有目前已知的CLP的结构比较 | 第81-82页 |
| ·hCLP与其他ABP的结构比较 | 第82-83页 |
| ·从结构解释CLP与actin结合的特异性 | 第83-85页 |
| ·与F—actin和5LO结合位点的相互关系 | 第85-86页 |
| ·对Capping蛋白的阻碍并不影响actin的聚合 | 第86-87页 |
| 第六章：前瞻——关于hCLP还未解决的问题 | 第87-90页 |
| ·CLP与F—actin的结合模式：为何不与G—actin结合 | 第87-89页 |
| ·coactosin／CLP如何抑制capping protein的活性 | 第89页 |
| ·CLP和5LO的结合方式 | 第89-90页 |
| 参考文献(2) | 第90-95页 |
| 附录一：常用试剂和溶液,常规实验方法 | 第95-98页 |
| 附录二：博士在读期间论文发表 | 第98页 |
