| 第一章 文献综述 | 第1-16页 |
| ·紫花苜蓿概述 | 第10-11页 |
| ·紫花苜蓿的起源和发展史 | 第10页 |
| ·紫花苜蓿的植物学特征 | 第10页 |
| ·紫花苜蓿的生物学特征 | 第10页 |
| ·紫花苜蓿的营养价值 | 第10-11页 |
| ·紫花苜蓿耐铝毒基因工程 | 第11-15页 |
| ·酸性土壤铝毒害的主要方式及其铝毒害机制 | 第11页 |
| ·酸性土壤中,植物对铝毒的抵御及抵御机制 | 第11-13页 |
| ·酸性土壤中,有机酸的解铝毒作用 | 第13-14页 |
| ·紫花苜蓿耐铝毒基因工程研究进展 | 第14-15页 |
| ·本研究的目的和主要内容 | 第15-16页 |
| 第二章 柠檬酸合成酶基因的克隆 | 第16-27页 |
| ·材料与方法 | 第16-23页 |
| ·材料 | 第16-18页 |
| ·方法 | 第18-23页 |
| ·结果 | 第23-26页 |
| ·CS基因的分离和T／A亚克隆策略如下图所示 | 第23-24页 |
| ·植物总RNA的提取与质量检测 | 第24页 |
| ·RT-PCR扩增CS基因 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pMD-cs | 第25页 |
| ·重组质粒pMD-cs的酶切鉴定 | 第25页 |
| ·重组质粒pMD-cs的PCR鉴定 | 第25-26页 |
| ·序列测定结果 | 第26页 |
| ·讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 柠檬酸合成酶基因植物表达载体的构建 | 第27-40页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·载体与受体菌 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-31页 |
| ·超纯质粒中量提取 | 第27-28页 |
| ·目的片断及载体片断的制备 | 第28页 |
| ·目的片断与载体的连接 | 第28-29页 |
| ·连接混合物的转化和阳性克隆的筛选与鉴定 | 第29页 |
| ·目的基因与pENTR／D-TOPO的连接 | 第29-30页 |
| ·入门克隆载体和植物表达载体pB2GW7的LR反应 | 第30-31页 |
| ·目的克隆的筛选与鉴定 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-39页 |
| ·柠檬酸合成酶光诱导型植物表达载体构建策略图 | 第31-32页 |
| ·中间载体pRbcs-cs的构建 | 第32-34页 |
| ·pPZP211-cs植物光诱导型表达载体的构建 | 第34-37页 |
| ·柠檬酸合成酶组成型植物表达载体构建策略图 | 第37页 |
| ·pB2-CS植物组成型表达载体的构建 | 第37-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 紫花苜蓿的遗传转化 | 第40-44页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·载体与植物材料 | 第40页 |
| ·主要培养基 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-41页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备方法 | 第40页 |
| ·电转化农杆菌程序 | 第40-41页 |
| ·农杆菌菌落PCR | 第41页 |
| ·农杆菌介导转化苜蓿 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-43页 |
| ·pPZP211-rbcs-CS植物表达载体转化农杆菌 | 第41-42页 |
| ·pB2-CS植物表达载体转化农杆菌 | 第42页 |
| ·苜蓿的转化与植株再生 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| ·农杆菌菌株对转化的影响 | 第43页 |
| ·筛选体系对转化的影响 | 第43页 |
| ·需要进一步解决的问题 | 第43-44页 |
| 第五章 柱花草耐铝毒基因的分离 | 第44-49页 |
| ·材料与方法 | 第44-45页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·方法 | 第45页 |
| ·结果 | 第45-48页 |
| ·柱花草、紫花苜蓿根尖染色情况 | 第45-46页 |
| ·不同浓度铝处理的柱花草差异显示PCR | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·柱花草的耐铝性 | 第48页 |
| ·柱花草差异显示PCR | 第48页 |
| ·需要进一步解决的问题 | 第48-49页 |
| 第六章 结论与展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 缩略词 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 攻读硕士期间发表文章 | 第55页 |