| 独创性声明 | 第1页 |
| 论文使用授权的说明 | 第3-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第8-18页 |
| ·漆酶及其生物学特性 | 第8-13页 |
| ·漆酶的来源 | 第9-10页 |
| ·漆酶的分子特性和催化功能 | 第10-11页 |
| ·植物与真菌漆酶的功能 | 第11-13页 |
| ·稻瘟病菌的研究进展 | 第13-16页 |
| ·国内外对稻瘟病菌漆酶研究的现状 | 第16页 |
| ·生物信息学 | 第16-17页 |
| ·本研究的意义 | 第17-18页 |
| 第一章 稻瘟病菌漆酶的生物信息学研究 | 第18-41页 |
| 1 本研究相关的生物信息学数据库和软件 | 第18-20页 |
| ·美国国立生物技术中心(NCBI) | 第18-19页 |
| ·稻瘟病菌全基因组数据库 | 第19页 |
| ·Pfam(Protein Families Database,蛋白家族数据库) | 第19页 |
| ·几种重要的生物信息学软件 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-22页 |
| ·研究对象 | 第20页 |
| ·稻瘟病菌漆酶基因的预测 | 第20-22页 |
| ·已知模式生物漆酶蛋白的氨基酸序列 | 第20页 |
| ·稻瘟病菌全基因组数据库 | 第20-21页 |
| ·表达序列标签(EST)库中搜索相关的漆酶基因 | 第21页 |
| ·blast分析 | 第21页 |
| ·SignalP 3.0 Server进行分析和预测 | 第21页 |
| ·疏水性预测 | 第21页 |
| ·ProtComp v6.0预测在细胞中的位置 | 第21页 |
| ·用(CDD)蛋白质保守序列数据库预测蛋白的保守区域 | 第21页 |
| ·PredictProtein预测二级结构 | 第21页 |
| ·用DNAstar预测目标蛋白的分子量、等电点、疏水氨基酸、极性氨基酸等 | 第21页 |
| ·植物和真菌漆酶氨基酸序列的搜索和进化树分析 | 第21-22页 |
| 3 结果与分析 | 第22-41页 |
| ·已知模式生物的漆酶的保守序列 | 第22页 |
| ·稻瘟病菌全基因组数据库搜索的结果 | 第22-23页 |
| ·EST库搜索的结果 | 第23-25页 |
| ·Blast分析的结果 | 第25页 |
| ·稻瘟病菌全基因组数据库中搜索到的基因的基本信息 | 第25-28页 |
| ·ProtComp v6.0的预测结果 | 第28页 |
| ·利用ProtScale对目标蛋白疏水性预测的结果 | 第28-29页 |
| ·PredictProtein的预测结果 | 第29-30页 |
| ·漆酶蛋白的保守域(CDD)预测结果 | 第30-31页 |
| ·DNAstar的分析结果 | 第31-32页 |
| ·稻瘟病菌假定漆酶氨基酸序列多重比对结果 | 第32-38页 |
| ·Tree View500分析的结果 | 第38-41页 |
| 第二章 稻瘟病菌LACZCZ基因的克隆与过量表达 | 第41-55页 |
| 1 材料与方法 | 第41-48页 |
| ·菌株和培养基 | 第41-42页 |
| ·稻瘟病菌基因组DNA的提取和检测： | 第42页 |
| ·过量表达载体的构建 | 第42-45页 |
| ·目的基因Laczcz的PCR扩增 | 第42-43页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| ·目的基因的T-A克隆 | 第44页 |
| ·连接产物的转化 | 第44页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第44页 |
| ·小量制备质粒DNA | 第44-45页 |
| ·带有目的基因的T质粒的酶切及回收 | 第45页 |
| ·过量表达载体的构建 | 第45-48页 |
| ·pTE11质粒的提取、纯化和双酶切回收 | 第45-46页 |
| ·pTE11和目的基因的连接和转化 | 第46页 |
| ·阳性转化子的鉴定 | 第46-47页 |
| ·过量表达质粒DNA的提取和纯化 | 第47-48页 |
| ·稻瘟病菌的原生质体的制备和转化 | 第48页 |
| 2 结果与讨论 | 第48-55页 |
| ·目的基因Lsczcz的PCR扩增结果 | 第48-49页 |
| ·目的基因的T-A克隆的菌液PCR结果 | 第49页 |
| ·从T载体上酶切回收目的基因的结果 | 第49-50页 |
| ·过量表达载体构建的结果 | 第50-52页 |
| ·原生质体转化的结果 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| ·关于PCR扩增 | 第53页 |
| ·关于过量表达载体的构建 | 第53页 |
| ·关于克隆 | 第53-55页 |
| 结论与展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
