| 1 引言 | 第1-14页 |
| 2 材料与方法 | 第14-27页 |
| ·实验动物与菌株 | 第14页 |
| ·外毒素生产、纯化及鉴定试剂 | 第14-15页 |
| ·外毒素生产及纯化试剂 | 第14页 |
| ·外毒素鉴定试剂 | 第14-15页 |
| ·绿脓杆菌ATCC27853基因组提取主要试剂 | 第15页 |
| ·PE40基因扩增及克隆所需主要试剂 | 第15页 |
| ·免疫毒素构建、表达及鉴定所需主要试剂 | 第15-16页 |
| ·子孢子提取所需主要试剂 | 第16页 |
| ·菌种和质粒 | 第16-17页 |
| ·使用引物 | 第17页 |
| ·计算机分析软件 | 第17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17-18页 |
| ·外毒素A的提取、纯化和鉴定 | 第18-19页 |
| ·培养基的配制 | 第18页 |
| ·细菌的培养 | 第18页 |
| ·外毒素A的提取 | 第18-19页 |
| ·纯化 | 第19页 |
| ·外毒素A鉴定 | 第19页 |
| ·兔抗PE高免血清的制备 | 第19-20页 |
| ·外毒素PE40基因的克隆 | 第20-21页 |
| ·绿脓杆菌ATCC27853基因组DNA的制备 | 第20页 |
| ·PEA基因的扩增 | 第20-21页 |
| ·PEA基因的克隆 | 第21页 |
| ·阳性克隆的扩大培养及保存 | 第21页 |
| ·重组克隆的酶切鉴定及测序 | 第21页 |
| ·免疫毒素构建及表达 | 第21-25页 |
| ·免疫毒素构建 | 第21-23页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第23-24页 |
| ·重组蛋白的鉴定 | 第24-25页 |
| ·抗堆型艾美耳球虫子孢子ScFv-PE40重组毒素活性的测定 | 第25-27页 |
| ·堆型艾美耳球虫卵囊的纯化及脱囊 | 第25页 |
| ·重组毒素初产物的制备 | 第25-26页 |
| ·细胞毒性实验 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-36页 |
| ·PEA提取结果 | 第27-29页 |
| ·浓度测定 | 第27页 |
| ·PEA纯度 | 第27页 |
| ·致病性试验 | 第27-29页 |
| ·兔抗PE血清效价测定结果 | 第29页 |
| ·PE40基因克隆结果 | 第29-32页 |
| ·绿脓杆菌基因组DNA纯度的鉴定 | 第29页 |
| ·PE40基因纯化结果 | 第29-30页 |
| ·PE40与pMD18-T simple载体连接及鉴定 | 第30页 |
| ·ATCC27853PE40基因测序结果及分析 | 第30-32页 |
| ·重组毒素的构建结果 | 第32-33页 |
| ·质粒pT-PE40和pET22-ScFv经Hind Ⅲ酶切后回收产物的纯化 | 第32页 |
| ·PE40与pET22-ScFv的连接 | 第32页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组毒素的表达结果 | 第33-34页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第33页 |
| ·重组毒素的Western-blot分析 | 第33-34页 |
| ·表达产物的存在形式 | 第34页 |
| ·重组毒素活性测定结果 | 第34-36页 |
| 4 讨论 | 第36-40页 |
| ·外毒素A的产生与提取方法探讨 | 第36页 |
| ·PE40基因的克隆 | 第36-37页 |
| ·免疫毒素的构建 | 第37页 |
| ·重组毒素ScFv-PE40在大肠杆菌中的表达 | 第37-38页 |
| ·表达系统的选择 | 第37-38页 |
| ·影响外源基因表达效率的因素 | 第38页 |
| ·抗堆型艾美耳球虫子孢子ScFv-PE40重组毒素活性的测定 | 第38-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-48页 |
| 附录A 主要试剂的配制 | 第48-50页 |
| 附录B PE40基因测序图 | 第50-52页 |
| 附录C SCFV-PE40基因测序图 | 第52-55页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第55-56页 |
| 作者简历 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
