| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| 1 三叶半夏组织培养研究进展 | 第13-15页 |
| ·三叶半夏的品种及产地 | 第13-14页 |
| ·三叶半夏组织培养技术研究进展 | 第14-15页 |
| 2 脱病毒组织培养技术研究进展 | 第15-19页 |
| ·热处理脱毒法 | 第16页 |
| ·愈伤组织培养法 | 第16-17页 |
| ·原生质体培养法 | 第17页 |
| ·珠心胚培养法 | 第17页 |
| ·花药培养法 | 第17页 |
| ·微型嫁接脱毒 | 第17页 |
| ·茎尖分生组织培养法 | 第17-18页 |
| ·不定芽再生脱毒 | 第18-19页 |
| 3 植物病毒检测方法概述 | 第19-25页 |
| ·寄主生物学测定法 | 第19页 |
| ·细胞病理学方法 | 第19-20页 |
| ·电镜观察方法 | 第20页 |
| ·血清学方法 | 第20-21页 |
| ·病毒dsRNA分析 | 第21-22页 |
| ·PCR和 RT-PCR技术 | 第22-23页 |
| ·核酸杂交方法 | 第23页 |
| ·基因芯片方法 | 第23-24页 |
| ·异源双链泳动分析法 | 第24-25页 |
| 4 侵染三叶半夏的病原微生物研究进展 | 第25-28页 |
| ·侵染三叶半夏及天南星科植物的病毒 | 第25-27页 |
| ·细菌性软腐病研究进展以及侵染三叶半夏的病原细菌 | 第27-28页 |
| 第二章 三叶半夏病毒的检测研究 | 第28-46页 |
| 1 材料与方法 | 第28-33页 |
| ·三叶半夏块茎采集与保存 | 第28-29页 |
| ·野生和人工栽培三叶半夏植株发病情况统计 | 第29页 |
| ·侵染三叶半夏的病毒的检测 | 第29-32页 |
| ·病毒粒子检查及感病植物的组织病变观察 | 第29页 |
| ·病毒双链 RNA(dsRNA)提取与病毒基因组分分析 | 第29-30页 |
| ·RT-PCR方法检测 SMV和 CMV | 第30-31页 |
| ·DAS-ELISA方法检测 SMV和 CMV | 第31-32页 |
| ·三叶半夏病毒寄主反应的测定 | 第32页 |
| ·CMV的寄主反应性测定 | 第32页 |
| ·SMV的寄主反应性测定 | 第32页 |
| ·侵染三叶半夏的病毒的调查 | 第32-33页 |
| ·野生和人工栽培三叶半夏植株发病情况统计 | 第32-33页 |
| ·野生和人工栽培三叶半夏植株病毒检测 | 第33页 |
| 2 结果及分析 | 第33-43页 |
| ·三叶半夏受病毒侵染的田间症状 | 第33页 |
| ·三叶半夏病毒粒子及组织病变观察结果 | 第33-35页 |
| ·侵染三叶半夏病毒dSRNA检测结果 | 第35-37页 |
| ·RT-PCR和 DAS-ELISA方法检测三叶半夏病毒的结果比较与分析 | 第37-38页 |
| ·三叶半夏病毒寄主反应的测定 | 第38-40页 |
| ·侵染三叶半夏的CMV的寄主反应性测定结果 | 第38-39页 |
| ·不同来源的SMV侵染三叶半夏的的寄主反应性测定结果 | 第39-40页 |
| ·侵染三叶半夏的病毒的调查结果 | 第40-43页 |
| ·野生和人工栽培三叶半夏植株发病情况统计结果 | 第40-42页 |
| ·不同地区的栽培三叶半夏的CMV和 SMV的血清学检测结果 | 第42-43页 |
| ·不同地区的野生三叶半夏的CMV和 SMV检测结果 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-46页 |
| 第三章 三叶半夏细菌性软腐病病原菌的分离、分子鉴定和致病性测定 | 第46-61页 |
| 1 材料与方法 | 第46-53页 |
| ·三叶半夏软腐病原菌的分离及纯化 | 第46-47页 |
| ·致病性测定和病原菌的重新分离 | 第47页 |
| ·三叶半夏软腐病原菌的形态鉴定 | 第47页 |
| ·菌落形态观察 | 第47页 |
| ·革兰氏染色 | 第47页 |
| ·扫描电镜观察 | 第47页 |
| ·生理生化反应鉴定 | 第47-49页 |
| ·接触酶试验 | 第47页 |
| ·氧化酶试验 | 第47-48页 |
| ·糖发酵试验 | 第48页 |
| ·尿素酶试验 | 第48页 |
| ·结晶紫果胶试验 | 第48页 |
| ·柠檬酸盐试验 | 第48页 |
| ·苯丙氨酸脱氨酶试验 | 第48页 |
| ·硫化氢试验 | 第48页 |
| ·明胶液化试验 | 第48页 |
| ·硝酸盐还原试验 | 第48页 |
| ·甲基红(Methyl Red)试验 | 第48-49页 |
| ·VP试验 | 第49页 |
| ·吲哚试验 | 第49页 |
| ·淀粉水解试验 | 第49页 |
| ·DNA的G+C mol%测定 | 第49-50页 |
| ·DNA提纯 | 第49页 |
| ·Tm值测定 | 第49-50页 |
| ·16SrDNA片段的扩增和序列分析 | 第50页 |
| ·软腐菌基因组DNA的提取 | 第50页 |
| ·16SrDNA片段的扩增 | 第50页 |
| ·PCR产物(目的片段)的克隆测序 | 第50页 |
| ·三叶半夏细菌性软腐病病原菌致腐特性研究 | 第50-53页 |
| ·试剂及配制 | 第50-51页 |
| ·三叶半夏苗酶提取液制备 | 第51页 |
| ·果胶酶活性的测定 | 第51-52页 |
| ·半乳糖醛酸标准曲线制作 | 第51页 |
| ·酶活测定 | 第51-52页 |
| ·纤维素酶活性的测定 | 第52页 |
| ·葡萄糖标准曲线制作 | 第52页 |
| ·纤维素酶(滤纸酶)活性测定 | 第52页 |
| ·蛋白酶活性测定 | 第52-53页 |
| ·标准曲线制作 | 第52页 |
| ·样品酶活测定 | 第52-53页 |
| ·软腐果胶菌RF1离体条件下产胞外酶活性的测定 | 第53页 |
| 2 结果及分析 | 第53-59页 |
| ·三叶半夏软腐菌的分离与回接试验结果 | 第53-54页 |
| ·RF系列菌株的形态观察、生理生化分析 | 第54-55页 |
| ·RF1的16SrDNA序列测定分析结果 | 第55-56页 |
| ·样品的酶提取液果胶酶活性测定结果 | 第56-57页 |
| ·样品的酶提取液纤维素酶活性测定结果 | 第57-58页 |
| ·葡萄糖标准曲线的制作 | 第57-58页 |
| ·蛋白酶活性测定结果 | 第58页 |
| ·蛋白酶活性的测定结果 | 第58页 |
| ·离体条件下RF1的胞外蛋白酶、纤维素酶和果胶酶测定结果 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 第四章 三叶半夏脱毒组培研究 | 第61-82页 |
| 1 材料与方法 | 第63-68页 |
| ·带病毒三叶半夏在组培过程中病毒含量的消长研究 | 第63-66页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第63-64页 |
| ·引物和试验材料 | 第64页 |
| ·PCR所用引物 | 第64页 |
| ·试验材料 | 第64页 |
| ·DAS-ELISA方法 | 第64页 |
| ·样品制备 | 第64页 |
| ·测定方法 | 第64页 |
| ·常规RT-PCR方法 | 第64-65页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第64-65页 |
| ·cDNA合成 | 第65页 |
| ·PCR反应 | 第65页 |
| ·REAL-TIME PCR方法 | 第65-66页 |
| ·植物总RNA提取 | 第65页 |
| ·总RNA中去除DNA | 第65页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第65-66页 |
| ·PCR扩增 | 第66页 |
| ·组培污染菌的鉴定及控制研究 | 第66-67页 |
| ·供试材料 | 第66页 |
| ·被污染组培苗的扫描电镜观察 | 第66页 |
| ·三叶半夏组培污染菌的分离和鉴定 | 第66页 |
| ·污染细菌的抗菌谱 | 第66页 |
| ·抗生素对组培污染的控制效果研究 | 第66-67页 |
| ·三叶半夏的脱毒组培苗的快繁研究 | 第67-68页 |
| ·待试材料 | 第67页 |
| ·三叶半夏组培培养基成分 | 第67页 |
| ·组培生产流程研究 | 第67-68页 |
| ·无菌丛生芽的扩繁 | 第67页 |
| ·丛生芽传代数对芽体质量的影响 | 第67-68页 |
| ·组培苗生根、炼苗及移栽 | 第68页 |
| ·大田生长比较试验 | 第68页 |
| ·离体块茎的形成及萌发试验 | 第68页 |
| 2 结果与分析 | 第68-79页 |
| ·对带 CMV组培苗的检测结果 | 第68-72页 |
| ·DAS-ELISA方法对样品含 CMV的测定结果 | 第68-69页 |
| ·RT-PCR方法对样品含CMV的测定结果 | 第69页 |
| ·Real-time PCR对样品含CMV的检测结果 | 第69-72页 |
| ·三叶半夏组培污染菌鉴定及抗生素试验结果 | 第72-75页 |
| ·污染三叶半夏组培苗的细菌分离纯化结果 | 第72-73页 |
| ·三叶半夏组培污染菌形态特征 | 第72-73页 |
| ·三叶半夏组培污染菌生理生化特征 | 第73页 |
| ·组培污染苗扫描电镜观察结果 | 第73-74页 |
| ·三叶半夏组培污染菌对抗生素的敏感性试验结果 | 第74页 |
| ·抗生素对组培污染的控制效果试验结果 | 第74-75页 |
| ·三叶半夏的脱毒组培苗的快繁研究结果 | 第75-79页 |
| ·培养时间对三叶半夏丛生芽组培增重的影响结果 | 第75-76页 |
| ·继代过程中丛生芽数量的变化 | 第76页 |
| ·继代次数对生长状况的影响 | 第76-77页 |
| ·三叶半夏组培苗生产流程 | 第77-78页 |
| ·大田生长比较试验结果 | 第78-79页 |
| ·三叶半夏离体块茎的形成及萌发试验结果 | 第79页 |
| 3 讨论及结论 | 第79-82页 |
| ·有关组培苗的病毒检测 | 第79-80页 |
| ·有关三叶半夏组培污染菌 | 第80-81页 |
| ·有关三叶半夏的脱毒快繁技术 | 第81-82页 |
| 第五章 结论和讨论 | 第82-85页 |
| 1 主要结论和创新点 | 第82-84页 |
| ·三叶半夏病毒病研究 | 第82页 |
| ·病毒鉴定 | 第82页 |
| ·三叶半夏带毒率调查 | 第82页 |
| ·CMV和 SMV侵染三叶半夏的特性 | 第82页 |
| ·三叶半夏软腐病研究 | 第82-83页 |
| ·软腐病原鉴定 | 第83页 |
| ·病原细菌的胞外酶检测 | 第83页 |
| ·三叶半夏脱毒组培过程研究 | 第83-84页 |
| ·组培污染菌的鉴定和消除 | 第83页 |
| ·三叶半夏组培苗病毒检测技术比较 | 第83-84页 |
| ·脱毒组培苗的快繁 | 第84页 |
| 2 下一步工作设想 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-96页 |
| 附件1 DAS-ELISA方法缓冲液的配制 | 第96-97页 |
| 附件2 MS培养基母液及激素母液的配制 | 第97-98页 |
| 附件3 双链RNA提取用试剂 | 第98-99页 |
| 附件4 缩写词表 | 第99-100页 |
| 作者简历 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101页 |
