| 第一章 绪论 | 第1-38页 |
| ·草甘膦的性能及发展状况 | 第12-13页 |
| ·抗草甘膦转基因作物的研究进展 | 第13-16页 |
| ·抗草甘膦转基因作物的抗性机理 | 第14-15页 |
| ·抗草甘膦基因的来源 | 第15-16页 |
| ·植物抗逆性的获得及其细胞分子生物学机制 | 第16-19页 |
| ·逆境下细胞水平的信号传导 | 第17-18页 |
| ·逆境下基因水平的信号传导 | 第18页 |
| ·植物抗逆性获得的细胞分子生物学机制 | 第18-19页 |
| ·高等植物启动子的研究进展 | 第19-25页 |
| ·植物启动子的结构 | 第19-21页 |
| ·植物转基因育种中所用的启动子 | 第21-24页 |
| ·推广应用的抗草甘膦转基因作物中驱动其表达的启动子 | 第24页 |
| ·分离草甘膦诱导强表达启动子是抗草甘膦转基因植物的一个方向 | 第24-25页 |
| ·植物差异表达基因克隆的方法和策略 | 第25-34页 |
| ·差别显示技术克隆基因的主要方法 | 第25-29页 |
| ·基因全长cDNA克隆方法—RACE及其他方法进展 | 第29-32页 |
| ·基因侧翼未知序列的PCR分离方法 | 第32-34页 |
| ·植物启动子缺失突变方法研究进展 | 第34-35页 |
| ·单侧缺失突变 | 第34页 |
| ·内部缺失突变 | 第34-35页 |
| ·衔接物扫描突变 | 第35页 |
| ·定点突变 | 第35页 |
| ·报告基因研究进展 | 第35-36页 |
| ·新霉素转移酶(NPT-Ⅱ) | 第36页 |
| ·荧光素酶活性检测 | 第36页 |
| ·GUS酶活性检测 | 第36页 |
| ·绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP) | 第36页 |
| ·本研究的研究目的和意义 | 第36-38页 |
| 第二章 草甘膦诱导表达的大豆与棉花EST序列的分离 | 第38-54页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·材料处理 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38-39页 |
| ·菌株与载体 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-44页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第39-40页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第40-41页 |
| ·DNA的限制性酶切反应 | 第41页 |
| ·目的DNA片段的电泳回收 | 第41页 |
| ·粘端连接 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·质粒DNA转化大肠杆菌 | 第42页 |
| ·总RNA的提取 | 第42-43页 |
| ·mRNA差异显示PCR | 第43-44页 |
| ·序列分析 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-52页 |
| ·总RNA准备 | 第44-45页 |
| ·利用DDRT-PCR分离草甘膦诱导的差异表达片段 | 第45-48页 |
| ·EST序列分析 | 第48-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第三章 草甘膦诱导棉花高表达基因的分离与功能分析 | 第54-86页 |
| ·材料与方法 | 第54-67页 |
| ·材料处理 | 第54页 |
| ·试剂 | 第54-55页 |
| ·总RNA的提取 | 第55页 |
| ·3′RACE、5′RACE及RT-PCR | 第55-56页 |
| ·反向Northern杂交鉴定DDRT-PCR阳性差异片段 | 第56-58页 |
| ·棉花基因组DNA提取方法 | 第58页 |
| ·序列分析 | 第58-59页 |
| ·转基因受体材料 | 第59页 |
| ·PCR引物设计 | 第59页 |
| ·植物表达载体及其特征 | 第59-61页 |
| ·棉花转化的花粉管通道法(子房注射法)操作程序 | 第61页 |
| ·转基因植株的卡那筛选流程 | 第61页 |
| ·农杆菌浸染方法 | 第61-63页 |
| ·烟草DNA的提取(郭兆奎，1999) | 第63-64页 |
| ·Southern blot方法(H(O|¨)ltke et al, 1995) | 第64-66页 |
| ·ag2基因的抗逆性鉴定 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-84页 |
| ·草甘麟诱导前后差异表达片段的分离 | 第67-68页 |
| ·Northern blot结果 | 第68页 |
| ·ag2基因全长cDNA序列的分离与分析 | 第68-71页 |
| ·ag2基因内含子的获得 | 第71-73页 |
| ·ag2蛋白结构预测、系统进化树建立及功能预测 | 第73-75页 |
| ·ag2基因植物表达载体的构建 | 第75-76页 |
| ·ag2基因的转化与转基因后代的分子检测 | 第76-79页 |
| ·ag2基因的初步功能鉴定 | 第79-84页 |
| ·讨论 | 第84-85页 |
| ·小结 | 第85-86页 |
| 第四章 草甘膦诱导高表达AG2启动子的分离与功能分析 | 第86-114页 |
| ·材料与方法 | 第86-92页 |
| ·DNA模板 | 第86页 |
| ·试剂 | 第86页 |
| ·启动子扩增使用的引物 | 第86-87页 |
| ·启动子扩增所使用的方法 | 第87-90页 |
| ·植物表达载体 | 第90页 |
| ·GFP基因 | 第90页 |
| ·植物受体 | 第90页 |
| ·启动子载体构建及转基因检测所用的PCR引物 | 第90-91页 |
| ·Agroinfiltration原理与方法 | 第91页 |
| ·GFP荧光检测与成像 | 第91-92页 |
| ·结果与分析 | 第92-109页 |
| ·利用Hemispecific PCR扩增ag2基因5′端序列 | 第92-93页 |
| ·利用Cassette ligation PCR进一步向5′端延伸 | 第93-94页 |
| ·ag2启动子序列同源性分析 | 第94-95页 |
| ·启动子结构及可能功能域分析 | 第95-98页 |
| ·ag2启动子的结构特征和片段缺失设计 | 第98-99页 |
| ·ag2启动子片段缺失和植物表达载体的构建 | 第99-100页 |
| ·植物表达载体正确性鉴定 | 第100-101页 |
| ·ag2启动子转化烟草及初步功能鉴定 | 第101-103页 |
| ·用Agroinfiltration瞬间表达GFP基因鉴定ag2启动子的功能 | 第103-109页 |
| ·讨论 | 第109-113页 |
| ·LM-PCR是一种较为理想的基因侧翼未知序列克隆方法 | 第109-110页 |
| ·启动子结构特点以及其他特异性DNA元件的预测分析 | 第110-111页 |
| ·Agroinfiltration的特点 | 第111-112页 |
| ·四种启动子的表达强度和适合的草甘膦诱导浓度 | 第112页 |
| ·ag2启动子的应用前景 | 第112-113页 |
| ·小结 | 第113-114页 |
| 结论 | 第114-116页 |
| 创新点 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 作者简历 | 第133页 |
