| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-25页 |
| ·四碳二羧酸转运载体的研究进展 | 第11-18页 |
| ·细菌四碳二羧酸转运载体的分类 | 第11-12页 |
| ·DctA型转运载体 | 第12-14页 |
| ·DcuA、DcuB和DcuC型转运载体 | 第14-16页 |
| ·TRAP载体 | 第16-17页 |
| ·CitT载体 | 第17-18页 |
| ·四碳二羧酸转运系统在生物固氮过程中的重要作用 | 第18-23页 |
| ·共生固氮菌中四碳二羧酸转运系统研究进展 | 第19-22页 |
| ·联合固氮菌中Dct系统研究进展 | 第22页 |
| ·通过对四碳二羧酸转运系统的改造提高固氮菌的固氮水平 | 第22-23页 |
| ·本工作的立题依据与研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 四碳二羧酸转运调控基因dctBD功能研究 | 第25-43页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·常用缓冲溶液 | 第27页 |
| ·常用溶液 | 第27-28页 |
| ·蛋白电泳溶液 | 第28-29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-36页 |
| ·碱裂解法提取质粒DNA | 第29-30页 |
| ·DNA片段的回收与纯化 | 第30页 |
| ·载体和目标片段的连接 | 第30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第31页 |
| ·质粒的接合转移 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的PCR检测 | 第32页 |
| ·菌株生长曲线的测定 | 第32-33页 |
| ·菌株固氮活性测定 | 第33页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第33页 |
| ·原核表达载体的构建及诱导表达 | 第33-35页 |
| ·蛋白质SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第35-36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-43页 |
| ·DctB和DctD的结构域分析 | 第36页 |
| ·dctB和dctD基因表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·构建携带固氮斯氏假单胞菌A1501 dctBD基因的质粒pLL2922 | 第37-39页 |
| ·dctB突变对A1501利用四碳二羧酸能力的影响 | 第39-41页 |
| ·dctB基因对菌株固氮活性的影响 | 第41-43页 |
| 第三章 四碳二羧酸转运结构基因dctPQM的功能研究 | 第43-63页 |
| ·材料与方法 | 第43-51页 |
| ·菌株和质粒 | 第43页 |
| ·插入突变株的构建方法 | 第43-44页 |
| ·极性与非极性突变株的构建 | 第44-46页 |
| ·DNA的提取 | 第46页 |
| ·PCR扩增反应 | 第46-48页 |
| ·dctM的克隆 | 第48-49页 |
| ·极性突变体DNA片段与非极性突变体DNA片段的克隆 | 第49页 |
| ·pK18mobF与pK18mobG的构建 | 第49-50页 |
| ·CaCl_2法制备感受态细胞 | 第50页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第50页 |
| ·突变株对四碳二羧酸利用的测定 | 第50-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-61页 |
| ·dctM插入突变株的构建 | 第51-53页 |
| ·dctM突变株A1710的生长特性的测定 | 第53-55页 |
| ·dctP突变株的构建 | 第55-59页 |
| ·dctP突变株对四碳二羧酸的利用情况 | 第59-60页 |
| ·dctP和dctM突变株固氮酶活性的测定 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 dct基因的表达调控的研究 | 第63-84页 |
| ·材料和方法 | 第63-67页 |
| ·菌株和质粒 | 第63页 |
| ·细菌培养 | 第63页 |
| ·试剂 | 第63-64页 |
| ·引物 | 第64-65页 |
| ·β-半乳糖苷酶(β-Galactosidase)活性的测定 | 第65页 |
| ·总RNA抽提 | 第65-66页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第66页 |
| ·目的基因扩增 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-81页 |
| ·dctM突变株的互补实验 | 第70-75页 |
| ·固氮斯氏假单胞菌dctP-lacZ融合基因的构建 | 第75-78页 |
| ·固氮斯氏假单胞菌dctB-lacZ融合基因的构建 | 第78-81页 |
| ·讨论 | 第81-84页 |
| 第五章 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-94页 |
| 附录 | 第94-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
