| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩写一览表 | 第8-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-35页 |
| 引言 | 第15页 |
| 1．1 棉花与黄萎病 | 第15-17页 |
| 1．1．1 棉花黄萎病病原菌 | 第15-16页 |
| 1．1．2 棉花黄萎病的防治以及存在的问题 | 第16-17页 |
| 1．2 植物与病原菌相互作用 | 第17-26页 |
| 1．2．1 病原菌效应蛋白 | 第17页 |
| 1．2．2 植物抗病基因 | 第17-20页 |
| 1．2．3 抗病蛋白的结构 | 第20-23页 |
| 1．2．4 抗病基因的分类 | 第23-24页 |
| 1．2．5 NBS-LRR R基因类似序列(RGAs) | 第24-25页 |
| 1．2．6 受体类蛋白(RLPs) | 第25-26页 |
| 1．3 病程相关(PRs)蛋白 | 第26-30页 |
| 1．3．1 几丁质酶与β-1，3-葡聚糖酶 | 第27-28页 |
| 1．3．2 PR-1蛋白 | 第28页 |
| 1．3．3 PR-5蛋白 | 第28页 |
| 1．3．4 防御素 | 第28-30页 |
| 1．3．5 PR-4蛋白 | 第30页 |
| 1．4 植物抗病基因的主要克隆方法 | 第30-32页 |
| 1．4．1 基于基因组变化 | 第30-31页 |
| 1．4．2 基于mRNA水平 | 第31页 |
| 1．4．3 基于蛋白质水平 | 第31页 |
| 1．4．4 基于功能基因组 | 第31-32页 |
| 1．5 植物抗病转基因的研究 | 第32-33页 |
| 1．6 RNAi(RNA interfering)作用 | 第33-34页 |
| 1．7 本研究的立论依据及意义 | 第34-35页 |
| 第二章 NBS-LRR基因家族基因文库的建立以及RGAs的分析 | 第35-43页 |
| 引言 | 第35页 |
| 2．1 材料与方法 | 第35-38页 |
| 2．1．1 实验材料 | 第35-36页 |
| 2．1．2 NBS-LRR保守域简并引物的设计 | 第36页 |
| 2．1．3 棉花材料的准备 | 第36页 |
| 2．1．4 棉花基因组DNA的提取 | 第36-37页 |
| 2．1．5 NBS-LRR RGAs的PCR扩增 | 第37-38页 |
| 2．1．6 NBS-LRR RGAs基因文库的建立 | 第38页 |
| 2．2 结果 | 第38-42页 |
| 2．2．1 NBS-LRR RGAs的PCR扩增 | 第38-40页 |
| 2．2．2 NBS-LRR RGAs基因文库的建立及序列测定 | 第40-42页 |
| 2．3 讨论 | 第42-43页 |
| 2．3．1 棉花基因组DNA的提取 | 第42页 |
| 2．3．2 NBS-LRR RGAs的PCR扩增 | 第42页 |
| 2．3．3 NBS-LRR RGAs基因文库的建立及序列测定与分析 | 第42-43页 |
| 第三章 棉花黄萎病菌诱导的Gbarvin基因的分离 | 第43-62页 |
| 引言 | 第43页 |
| 3．1 材料与方法 | 第43-47页 |
| 3．1．1 实验材料 | 第43-44页 |
| 3．1．2 Gbarvin基因简并引物的设计 | 第44页 |
| 3．1．3 棉花黄萎病菌的培养 | 第44页 |
| 3．1．4 棉花材料的准备 | 第44页 |
| 3．1．5 棉花总RNA的提取 | 第44-45页 |
| 3．1．6 mRNA的纯化 | 第45页 |
| 3．1．7 cDNA的合成 | 第45页 |
| 3．1．8 PCR扩增Gbarvin基因及克隆载体的构建 | 第45-46页 |
| 3．1．9 Gbarvin序列的测定 | 第46-47页 |
| 3．2 结果 | 第47-50页 |
| 3．2．1 棉花总RNA的提取 | 第47页 |
| 3．2．2 mRNA的纯化 | 第47页 |
| 3．2．3 cDNA的合成 | 第47-48页 |
| 3．2．4 PCR扩增Gbarvin基因片段及克隆载体的构建 | 第48-49页 |
| 3．2．5 Gbarvin序列的测定 | 第49-50页 |
| 3．3 讨论 | 第50-62页 |
| 3．3．1 Gbarvin基因简并引物的设计 | 第50页 |
| 3．3．2 棉花总RNA的提取 | 第50页 |
| 3．3．3 Gbarvin氨基酸序列分析 | 第50页 |
| 3．3．4 Gbarvin结构预测与功能分析 | 第50-62页 |
| 第四章 Gbarvin对黄萎病病原菌的作用 | 第62-70页 |
| 引言 | 第62页 |
| 4．1 材料与方法 | 第62-65页 |
| 4．1．1 实验材料 | 第62-63页 |
| 4．1．2 Gbarvin引物的设计 | 第63页 |
| 4．1．3 Gbarvin基因的PCR扩增 | 第63页 |
| 4．1．4 Gbarvin原核表达载体的构建 | 第63-64页 |
| 4．1．5 Gbarvin的表达 | 第64页 |
| 4．1．6 黄萎病病原菌的培养 | 第64页 |
| 4．1．7 Gbarvin对黄萎病病原菌生长的作用 | 第64-65页 |
| 4．1．8 Gbarvin对黄萎病病原菌孢子萌发的作用 | 第65页 |
| 4．2 结果 | 第65-69页 |
| 4．2．1 Gbarvin基因的PCR扩增 | 第65页 |
| 4．2．2 构建Gbarvin基因原核表达载体 | 第65-67页 |
| 4．2．3 Gbarvin的原核表达 | 第67页 |
| 4．2．4 Gbarvin对黄萎病病原菌生长的作用 | 第67-68页 |
| 4．2．5 Gbarvin对黄萎病病原菌孢子萌发的作用 | 第68-69页 |
| 4．3 讨论 | 第69-70页 |
| 4．3．1 Gbarvin的原核表达 | 第69页 |
| 4．3．2 Gbarvin对黄萎病病原菌生长的作用 | 第69-70页 |
| 第五章 Gbarvin基因RNAi体系的建立及转染拟南芥 | 第70-78页 |
| 引言 | 第70页 |
| 5．1 材料与方法 | 第70-73页 |
| 5．1．1 植物材料 | 第70页 |
| 5．1．2 RNAi载体与宿主菌 | 第70页 |
| 5．1．3 培养基 | 第70-71页 |
| 5．1．4 工具酶、分子量标准与主要化学试剂 | 第71页 |
| 5．1．5 Gbarvin引物的设计 | 第71页 |
| 5．1．6 Gbarvin基因的扩增 | 第71页 |
| 5．1．7 RNAi载体的构建 | 第71-73页 |
| 5．1．8 植物材料的准备 | 第73页 |
| 5．1．9 RNAi载体浸染拟南芥 | 第73页 |
| 5．2 结果 | 第73-76页 |
| 5．2．1 Gbarvin基因的扩增 | 第73-74页 |
| 5．2．2 RNAi载体的构建 | 第74页 |
| 5．2．3 RNAi载体浸染拟南芥 | 第74-76页 |
| 5．3 讨论 | 第76-78页 |
| 5．3．1 双生病毒RNAi载体 | 第76页 |
| 5．3．2 Gbarvin的RNAi | 第76-78页 |
| 第六章 Gbarvin基因转化拟南芥与烟草 | 第78-85页 |
| 引言 | 第78页 |
| 6．1 材料与方法 | 第78-81页 |
| 6．1．1 实验材料 | 第78页 |
| 6．1．2 Gbarvin引物的设计 | 第78-79页 |
| 6．1．3 Gbarvin基因的扩增 | 第79页 |
| 6．1．4 Gbarvin克隆载体的构建 | 第79页 |
| 6．1．5 Gbarvin植物过表达载体的构建 | 第79页 |
| 6．1．6 过表达载体转染根瘤农杆菌 | 第79-80页 |
| 6．1．7 根瘤农杆菌转化拟南芥 | 第80-81页 |
| 6．1．8 根瘤农杆菌转化烟草 | 第81页 |
| 6．2 结果 | 第81-84页 |
| 6．2．1 Gbarvin基因的扩增 | 第81页 |
| 6．2．2 Gbarvin克隆载体的构建 | 第81-84页 |
| 6．2．3 Gbarvin植物过表达载体的构建 | 第84页 |
| 6．3 讨论 | 第84-85页 |
| 6．3．1 根瘤农杆菌的转染 | 第84页 |
| 6．2．3 根瘤农杆菌转化拟南芥 | 第84页 |
| 6．2．3 根瘤农杆菌转化烟草 | 第84-85页 |
| 第七章 结论 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 附录 | 第94页 |
