| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-19页 |
| 第一章 SARS-CoV的研究进展 | 第19-59页 |
| ·前言 | 第19-22页 |
| ·冠状病毒的病毒粒子形态及结构 | 第22-23页 |
| ·SARS病毒的分类学地位 | 第23-27页 |
| ·SARS病毒的基因组结构 | 第27-32页 |
| ·SARS病毒的ORF | 第27-30页 |
| ·SARS病毒的TRS | 第30-32页 |
| ·SARS病毒基因组编码蛋白的结构和功能 | 第32-49页 |
| ·结构蛋白 | 第34-43页 |
| ·S蛋白 | 第34-38页 |
| ·M蛋白和E蛋白 | 第38-43页 |
| ·N蛋白 | 第43页 |
| ·非结构蛋白 | 第43-44页 |
| ·附属蛋白 | 第44-47页 |
| ·未来的发展方向 | 第47-49页 |
| ·检测和诊断 | 第49-56页 |
| ·免疫学检测技术 | 第49-52页 |
| ·SARS的抗体检测 | 第49-51页 |
| ·SARS的抗原检测 | 第51-52页 |
| ·PCR检测技术 | 第52-54页 |
| ·病毒的细胞分离培养 | 第54-55页 |
| ·生物芯片技术 | 第55-56页 |
| ·SARS的预防和治疗前景 | 第56-59页 |
| 第二章 噬菌体展示技术及应用 | 第59-75页 |
| ·前言 | 第59-60页 |
| ·噬菌体展示技术的基本原理及其发展 | 第60-65页 |
| ·噬菌体展示文库的构建 | 第65-67页 |
| ·噬菌体展示抗体文库的构建 | 第65-67页 |
| ·噬菌体展示多肽文库的构建 | 第67页 |
| ·噬菌体展示技术的应用 | 第67-73页 |
| ·噬菌体展示库技术 | 第67-69页 |
| ·研究珍断用试剂 | 第69-70页 |
| ·药物设计和疫苗开发 | 第70-71页 |
| ·抗原表位分析 | 第71-72页 |
| ·蛋白质互作关系研究 | 第72-73页 |
| ·蛋白酶活性中心及其底物(或抑制剂) | 第73页 |
| ·筛选亲和分离蛋白质所需的配基 | 第73页 |
| 本论文的研究背景、目的和意义 | 第73-75页 |
| 第三章 研究方法 | 第75-88页 |
| ·分子生物学实验技术 | 第75-80页 |
| ·质粒DNA的制备和纯化 | 第75-76页 |
| ·质粒的小量制备 | 第75页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第75-76页 |
| ·限制性酶消化 | 第76-77页 |
| ·DNA片段回收 | 第77-78页 |
| ·低熔点琼脂糖凝胶法 | 第77页 |
| ·用试剂盒从琼脂糖凝胶中回收DNA | 第77-78页 |
| ·DNA片段和载体的连接 | 第78页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第78-79页 |
| ·冷氯化钙法制备新鲜感受态细胞 | 第78页 |
| ·电转化感受态细胞的制备 | 第78-79页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第79-80页 |
| ·常规转化法 | 第79页 |
| ·质粒的快速转化法 | 第79页 |
| ·质粒的电转化法 | 第79-80页 |
| ·菌种的保藏 | 第80页 |
| ·细胞学实验技术 | 第80-83页 |
| ·细胞培养基的配制 | 第80-81页 |
| ·细胞传代培养 | 第81页 |
| ·细胞的冻存与复苏 | 第81-82页 |
| ·冻存 | 第81页 |
| ·复苏 | 第81-82页 |
| ·细胞转染 | 第82页 |
| ·流式细胞术分析 | 第82-83页 |
| ·蛋白质化学实验技术 | 第83-88页 |
| ·用原核表达系统表达蛋白 | 第83页 |
| ·Ni~(++)亲和层析法纯化蛋白质 | 第83-84页 |
| ·Western Blot | 第84页 |
| ·噬菌体文库筛选 | 第84-88页 |
| ·噬菌体十五肽文库的扩增 | 第84-85页 |
| ·从培养液中提纯病毒粒子 | 第85页 |
| ·制备饥饿态细胞 | 第85-86页 |
| ·筛选过程 | 第86页 |
| ·Input滴定 | 第86页 |
| ·ELISA | 第86-88页 |
| 第四章 一种新的SARS CoV特异性噬菌体展示单链抗体的鉴定 | 第88-104页 |
| ·前言 | 第88-90页 |
| ·材料和方法 | 第90-94页 |
| ·文库、菌株和试剂 | 第90页 |
| ·淘洗 | 第90-91页 |
| ·scFv-噬菌体的准备 | 第91页 |
| ·单克隆scFv噬菌体ELISA | 第91页 |
| ·DNA测序 | 第91页 |
| ·原核表达和Western blot分析 | 第91-92页 |
| ·SA59B scFv-抗体的产生和纯化 | 第92页 |
| ·SA59B scFv-抗体的HRP标记 | 第92-93页 |
| ·在SA59B-HRP溶液中HRP和SA59B scFv-抗体浓度的测定 | 第93页 |
| ·SA59B-HRP酶结合物工作浓度的测定 | 第93页 |
| ·SA59B-HRP ELISA检测SARS CoV裂解液 | 第93-94页 |
| ·统计分析 | 第94页 |
| ·结果与分析 | 第94-101页 |
| ·SARS-CoV特异性结合scFvs的淘洗 | 第94-95页 |
| ·第3轮淘洗后scFv-噬菌体文库的特异性评价 | 第95-96页 |
| ·SA59B scFv基因的序列 | 第96-98页 |
| ·可溶性SA59B scFv-抗体的表达 | 第98-99页 |
| ·可溶性SA59B scFv-抗体表达的纯化 | 第99-100页 |
| ·SA59B scFv-抗体的HRP标记 | 第100页 |
| ·SA59B-HRP对SARS-CoV的结合活性评价 | 第100-101页 |
| ·讨论 | 第101-104页 |
| 第五章 SARS病毒Spike蛋白羧基端321个氨基酸残基(S2-321)作为诊断抗原的研究 | 第104-114页 |
| ·前言 | 第104-105页 |
| ·材料和方法 | 第105-107页 |
| ·S2-321的扩增 | 第105页 |
| ·重组蛋白的原核表达 | 第105-106页 |
| ·SDS-PAGE和Western blotting | 第106页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第106-107页 |
| ·研究结果 | 第107-110页 |
| ·S2-321基因片段的扩增与克隆 | 第107页 |
| ·S2-321在大肠杆菌BL21 DE3中表达与纯化 | 第107-108页 |
| ·S2-321抗原和SARS恢复病人血清最低检测度的确定 | 第108-109页 |
| ·S2-321抗原的临床诊断试验 | 第109-110页 |
| ·讨论 | 第110-114页 |
| 第六章 SARS病毒N蛋白诱导细胞凋亡及其相互作用蛋白研究 | 第114-131页 |
| ·前言 | 第114-118页 |
| ·材料和方法 | 第118-120页 |
| ·病毒、质粒、菌株和细胞 | 第118页 |
| ·噬菌体展示文库和试剂 | 第118页 |
| ·引物 | 第118-119页 |
| ·RNA的提取 | 第119页 |
| ·RT-PCR | 第119页 |
| ·N基因表达载体的构建 | 第119页 |
| ·pEGFP-N转染Vero E6 | 第119页 |
| ·流式细胞术检测DNA亚二倍体峰 | 第119-120页 |
| ·N基因的原核表达与纯化 | 第120页 |
| ·15肽文库的筛选 | 第120页 |
| ·DNA测序 | 第120页 |
| ·结果与分析 | 第120-130页 |
| ·N基因的RT-PCR与克隆 | 第120-121页 |
| ·N基因的原核表达与纯化 | 第121-122页 |
| ·N基因诱导细胞凋亡的初步检测 | 第122-123页 |
| ·N蛋白特异性结合15肽的淘洗 | 第123-124页 |
| ·15肽噬菌体文库的特异性评价 | 第124-126页 |
| ·15肽序列分析 | 第126页 |
| ·N蛋白相互作用因子分析 | 第126-130页 |
| ·讨论 | 第130-131页 |
| 研究总结 | 第131-134页 |
| 创新点 | 第134-135页 |
| 参考文献 | 第135-166页 |
| 博士期间发表和待发表论文 | 第166-167页 |
| 致谢 | 第167-168页 |
