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虎杖颗粒愈伤组织悬浮培养体系建立与白藜芦醇的生物合成、调控及生物转化研究

第一章 概论第1-29页
 1 立题的目的与意义第18页
 2 白藜芦醇的国内外研究现状、水平和发展趋势第18-29页
   ·白藜芦醇的结构、植物中的分布、药理作用第18-22页
     ·白藜芦醇的结构第19页
     ·白藜芦醇在植物中的分布第19页
     ·药理作用第19-22页
   ·植物药用活性成分在不同组织部位的含量及其在组织细胞中的定位研究第22-23页
   ·矿质营养、植物内源激素的变化对植物药用活性物质形成的影响第23页
   ·植物细胞培养生产次生代谢物质研究进展第23-25页
   ·微生物转化研究第25-26页
   ·白藜芦醇生物合成研究第26-29页
第二章 虎杖白藜芦醇组织化学定位、含量检测及高含量资源的筛选第29-43页
 1 材料与方法第29-31页
   ·材料第29页
   ·方法第29-31页
     ·不同地区虎杖白藜芦醇的提取第29页
     ·虎杖不同组织部位白藜芦醇的提取第29-30页
     ·高效液相色谱法测定白藜芦醇的含量第30页
     ·制片条件的选择与制片方法第30页
     ·荧光显微观察第30页
     ·荧光分光光度计检测切片中白藜芦醇的含量第30-31页
 2 结果与分析第31-38页
   ·HPLC测定白藜芦醇标样及虎杖样品中白藜芦醇第31页
   ·虎杖中各组织部位的白藜芦醇含量测定第31-32页
   ·不同采集月份的虎杖鲜根状茎中白藜芦醇含量变化第32页
   ·虎杖鲜根茎与鲜根茎芽、干根茎粉中白藜芦醇含量的比较第32-33页
   ·不同地理条件对虎杖白藜芦醇的含量第33-35页
   ·显微镜观察结果第35-37页
     ·明场显微观察第35页
     ·荧光显微观察第35-37页
   ·HPLC检测根茎中组织部位的白藜芦醇含量第37页
   ·荧光分光光度计检测虎杖根茎中白藜芦醇第37-38页
 3.讨论第38-43页
第三章 影响虎杖根状茎白藜芦醇含量的因素探讨第43-63页
 1 材料与方法第43-45页
   ·材料第43-44页
   ·方法第44-45页
     ·虎杖白藜芦醇的高效液相测定第44页
     ·虎杖根状茎中无机元素的分析第44页
     ·气象因素第44页
     ·植物激素检测波长的选择和分离条件第44页
     ·内源激素的提取、纯化及测定第44-45页
     ·标准溶液的配制第45页
     ·相关分析与主成分分析方法第45页
 2 结果与分析第45-60页
   ·高效液相条件的确定第45-48页
     ·波长的选定第45-46页
     ·洗脱条件的选择第46页
     ·梯度洗脱条件第46-47页
     ·线性关系的测定第47-48页
   ·内源激素对虎杖根状茎白藜芦醇含量的影响第48-54页
     ·虎杖中各月份内源激素与白藜芦醇含量第48-49页
     ·植物内源激素与白藜芦醇的含量变化分析第49-50页
     ·内源激素与白藜芦醇含量的相对集中性和离散性第50页
     ·内源激素与白藜芦醇含量的相关系数分析第50-51页
     ·内源激素与白藜芦醇含量的主成分分析第51-54页
   ·无机元素、气象因素对虎杖白藜芦醇含量变化的影响第54-60页
     ·无机元素对虎杖白藜芦醇含量变化的影响第54页
     ·虎杖根状茎中各月白藜芦醇的含量(HPLC法)与气象要素的统计第54-56页
     ·各分析指标的相对集中性和离散性第56-57页
     ·各分析指标的相关性分析第57页
     ·无机元素、气象因素对虎杖白藜芦醇含量的主成分分析第57-59页
     ·白藜芦醇量的动态变化与主成分的多元相关与回归分析第59-60页
 3 讨论第60-63页
第四章 虎杖愈伤组织诱导及颗粒状愈伤组织悬浮培养体系的的建立第63-80页
 1 材料与方法第63-66页
   ·材料第63页
   ·方法第63-66页
     ·愈伤组织适宜培养基的筛选第63-64页
     ·愈伤组织生长曲线第64页
     ·愈伤组织白藜芦醇提取与测定第64页
     ·愈伤组织白藜芦醇变化曲线的测定第64-65页
     ·虎杖颗粒状愈伤组织悬浮培养体系的建立第65页
     ·虎杖颗粒愈伤组织悬浮培养生长状态的观察与测定第65-66页
     ·虎杖颗粒状愈伤组织悬浮培养第66页
     ·颗粒愈伤组织悬浮培养白藜芦醇的提取及含量测定第66页
 2.结果与分析第66-77页
   ·不同基本培养基上的诱导实验第66-67页
   ·激素种类及水平的诱导比较实验第67-68页
   ·虎杖根状茎和根状茎芽在不同激素水平培养基上的诱导效果比较第68-69页
   ·虎杖茎和叶在不同培养基上的诱导实验第69页
   ·不同材料诱导的愈伤组织中白藜芦醇含量的检测第69页
   ·虎杖根茎芽愈伤组织中高产白票芦醇细胞的筛选第69-70页
   ·愈伤组织生长曲线及生长状况第70-71页
   ·愈伤组织生长曲线中不同时期白藜芦醇的含量变化第71-72页
   ·细胞悬浮培养生长的正交实验第72-74页
   ·虎杖颗粒状愈伤组织悬浮培养过程中悬浮液各种理化因子的变化第74-77页
     ·悬浮培养液中溶氧水平、pH、电导率、渗透压的变化第74-76页
     ·虎杖悬浮细胞的生长和白藜芦醇的变化情况第76-77页
 3.讨论第77-80页
第五章 2L气升式生物反应器悬浮扩大培养虎杖颗粒愈伤组织研究第80-92页
 1、材料与方法第80-83页
     ·材料第80页
   ·方法第80-83页
     ·生物反应器培养虎杖细胞第80-81页
     ·虎杖悬浮细胞培养液各种生理指标的测定第81页
     ·苯丙氨酸转氨酶活性测定第81-82页
     ·过氧化物酶活力的测定第82页
     ·总糖含量的测定第82页
     ·蛋白质含量的测定第82页
     ·胞内胞外白藜芦醇的提取与检测第82-83页
 2.结果与分析第83-90页
   ·细胞生长与细胞生长态势的关系第83-90页
     ·培养液中糖利用动态第83页
     ·培养液中pH值变化第83-84页
     ·培养液中溶氧水平的变化第84-85页
     ·培养液中渗透压的变化第85页
     ·培养液中电导率的变化第85-86页
     ·培养液中苯丙氨酸转氨酶(PAL)的活性第86-87页
     ·培养液中过氧化物酶的活力与悬浮细胞生长的关系第87页
     ·培养液中蛋白质含量的变化第87-88页
     ·悬浮细胞生物量的变化第88页
     ·胞内外白藜芦醇含量的变化第88-90页
     ·不同大小细胞团中白藜芦醇及其类似物含量的区别第90页
 3.讨论第90-92页
第六章 虎杖白藜芦醇的生物合成途径探讨第92-105页
 1 材料与方法第92-93页
   ·材料第92页
   ·方法第92-93页
     ·苯丙氨酸作为前体添加调控实验第92-93页
     ·白藜芦醇类似物调控实验第93页
     ·苯丙氨酸与白藜芦醇类似物添加调控中,培养液各种生理生化指标测定第93页
 2 结果与分析第93-102页
   ·苯丙氨酸(Phe)作为前体的研究第93-98页
     ·Phe诱导子对虎杖悬浮细胞液pH和溶氧水平(DO)的影响第93-94页
     ·Phe诱导子对悬浮培养体系电导率和渗透压的影响第94-95页
     ·Phe诱导子对培养液POD和苯丙氨酸转氨酶(PAL)的影响第95-96页
     ·Phe诱导子对悬浮培养液碳源浓度的影响第96-97页
     ·Phe前体对虎杖悬浮细胞生长的影响第97页
     ·苯丙氨酸诱导子对白藜芦醇的影响第97-98页
   ·白藜芦醇类似物调控第98-102页
     ·细胞生长量及培养液中pH值的变化第98页
     ·培养液中溶氧水平和电导率的变化第98-99页
     ·培养液渗透压和POD的变化第99-100页
     ·培养液中碳源和PAL的变化第100-101页
     ·白藜芦醇类似物及白藜芦醇的变化第101-102页
 3 讨论第102-105页
第七章 诱导因子对虎杖白藜芦醇产生与积累的调控第105-125页
 1 材料与方法第105-106页
   ·材料第105页
   ·方法第105-106页
     ·无机元素的调控第105页
     ·外源生长物质KT的调控第105-106页
     ·微生物诱导因子的添加第106页
     ·紫外照射诱变第106页
     ·细胞生理态势指标的测定第106页
     ·蛋白质含量的测定第106页
     ·糖含量的测定第106页
     ·过氧化物酶(POD)活性分析第106页
     ·苯丙氨酸转氨酶活性的测定第106页
     ·细胞内、外白藜芦醇的提取及含量的测定第106页
 2 结果与分析第106-122页
   ·无机元素的调控第106-109页
     ·Mg~(2+)的影响第107-108页
     ·Cu~(2+)的影响第108-109页
   ·外源生长物质激动素(KT)的调控第109-114页
       ·悬浮培养液中溶氧水平及电导率的变化第109-111页
     ·悬浮培养液中渗透压和pH的变化第111-112页
     ·悬浮培养液中过氧化物酶及糖变化第112-113页
     ·悬浮细胞的生长和白藜芦醇积累第113-114页
   ·微生物诱导因子的调控第114-117页
     ·细胞培养液中pH及溶氧水平的变化第114页
     ·细胞培养液中电导率和渗透压的变化第114-115页
     ·细胞培养液中POD和蛋白质的变化第115-116页
     ·细胞培养液中苯丙氨酸转氨酶(PAL)和碳源的变化第116-117页
     ·微生物诱导因子对白藜芦醇的影响第117页
   ·紫外照射诱变第117-122页
     ·培养液中溶氧水平和电导率的变化第117-118页
     ·培养液中渗透压和pH的变化第118-119页
     ·培养液中蛋白质和糖的变化第119-120页
     ·培养液中PAL和POD的变化第120-121页
     ·紫外照射对悬浮细胞的生长和白藜芦醇积累的影响第121-122页
 3 讨论第122-125页
   ·无机元素调控影响第122-123页
   ·外源生长物质激动素(KT)的调控第123页
   ·微生物诱导的影响第123页
   ·紫外诱变的影响第123-125页
第八章 利用生物转化技术提高虎杖中白藜芦醇的含量及其转化机理探讨第125-136页
 1、材料与方法第125-127页
   ·材料第125-126页
   ·方法第126-127页
     ·微生物诱导虎杖白藜芦醇前体物转化成白藜芦醇第126页
     ·诱导虎杖白藜芦醇类似物生物转化为白藜芦醇的条件第126页
     ·高效转化虎杖愈伤组织材料中白藜芦醇的研究第126页
     ·白藜芦醇类似物的提取与分离第126-127页
     ·白藜芦醇类似物结构鉴定第127页
 2 结果分析第127-134页
   ·虎杖白藜芦醇前体物的微生物转化第127-128页
   ·微生物转化条件第128-129页
   ·虎杖愈伤组织中白藜芦醇类似物的高效转化第129-130页
   ·白藜芦醇类似物的提取、分离及结构鉴定第130页
   ·白藜芦醇类似物的结构第130-134页
 3 讨论第134-136页
缩略词表第136-137页
全文总结第137-140页
参考文献第140-148页
图版及图版说明第148-164页
致谢第164-165页
作者简介第165-167页

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