| 中文摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-44页 |
| ·自然界存在的可再生资源-木质纤维、几丁质的研究现状 | 第14-17页 |
| ·纤维素 | 第14-15页 |
| ·半纤维素 | 第15页 |
| ·几丁质和壳聚糖 | 第15-16页 |
| ·木质纤维类和几丁质类物质水解方法 | 第16-17页 |
| ·木质纤维类物质水解方法 | 第16页 |
| ·几丁质类物质水解方法 | 第16-17页 |
| ·纤维素降解酶系的研究现状 | 第17-20页 |
| ·产纤维素酶系的细菌 | 第17-18页 |
| ·产纤维素酶系的真菌 | 第18-19页 |
| ·纤维素降解酶 | 第19-20页 |
| ·半纤维素降解酶系的研究现状 | 第20-23页 |
| ·产半纤维素酶系的细菌 | 第20页 |
| ·产半纤维素酶系的真菌 | 第20-21页 |
| ·纤维素降解酶 | 第21-23页 |
| ·几丁质类物质降解酶系的研究进展 | 第23-25页 |
| ·降解几丁质类物质的微生物 | 第23页 |
| ·几丁质类物质的降解酶 | 第23-25页 |
| ·丝状真菌cDNA 文库构建的研究现状 | 第25-30页 |
| ·试剂盒的选择 | 第25-29页 |
| ·丝状真菌削减文库的研究现状 | 第29-30页 |
| ·立题背景及研究内容 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-44页 |
| 第二章 草菇cDNA 削减文库的构建 | 第44-63页 |
| ·材料与方法 | 第44-54页 |
| ·菌株及培养 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器设备 | 第45-46页 |
| ·正交实验的设计 | 第46页 |
| ·正交实验一 | 第46页 |
| ·正交实验二 | 第46页 |
| ·草菇酶液的制备 | 第46-47页 |
| ·木聚糖酶酶活测定方法 | 第47页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第47-48页 |
| ·草菇总RNA 提取 | 第48-49页 |
| ·菌株及培养 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·经典法 | 第48页 |
| ·简易的方法 | 第48-49页 |
| ·改进的方法 | 第49页 |
| ·RNA 质量的检验 | 第49页 |
| ·草菇poly(A)~+mRNA 分离与鉴定 | 第49-50页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·主要步骤 | 第49-50页 |
| ·分离的poly(A)~+mRNA 的鉴定 | 第50页 |
| ·诱导培养生成的草菇菌丝cDNA 第一链的合成 | 第50-51页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·具体方法 | 第50-51页 |
| ·非诱导培养草菇菌丝所提mRNA 的变性及固定 | 第51页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·具体方法 | 第51页 |
| ·非诱导mRNA 与诱导cDNA 第一链杂交 | 第51-52页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·主要试剂与设备 | 第51-52页 |
| ·具体方法 | 第52页 |
| ·削减cDNA 文库的构建 | 第52-54页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·主要试剂与设备 | 第52页 |
| ·具体方法 | 第52-54页 |
| ·结果 | 第54-60页 |
| ·草菇中半纤维素酶和纤维素酶最佳mRNA 丰度的诱导条件 | 第54-55页 |
| ·总 RNA 样品的分析 | 第55-57页 |
| ·总RNA 样品的纯度分析 | 第55页 |
| ·总 RNA 样品的完整性分析 | 第55-57页 |
| ·poly(A)~+mRNA 的样品分析 | 第57-58页 |
| ·cDNA LD-PCR 产物 | 第58页 |
| ·削减cDNA 文库的构建 | 第58-60页 |
| ·cDNA 的分级分离 | 第58页 |
| ·cDNA 削减噬菌体文库的构建及文库滴度的确定 | 第58-59页 |
| ·cDNA 削减噬菌体文库的扩增及扩增文库滴度的确定 | 第59页 |
| ·cDNA 文库的鉴定 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| ·草菇中半纤维素酶和纤维素酶最佳mRNA 丰度的诱导条件 | 第60页 |
| ·草菇总 RNA 的提取 | 第60页 |
| ·差异杂交 | 第60页 |
| ·削减文库的构建 | 第60-61页 |
| ·本章小结 | 第61页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 第三章 草菇木聚糖酶基因的克隆及表达 | 第63-80页 |
| ·材料和方法 | 第64-68页 |
| ·菌株与质粒 | 第64-65页 |
| ·主要试剂 | 第65页 |
| ·PCR 引物 | 第65页 |
| ·培养基和培养条件 | 第65页 |
| ·主要仪器设备 | 第65页 |
| ·电转化感受态细胞的制备 | 第65-66页 |
| ·草菇基因组DNA的提取 | 第66页 |
| ·琼脂糖电泳胶回收DNA片断和质粒抽提 | 第66页 |
| ·原核重组质粒的构建 | 第66-67页 |
| ·木聚糖酶基因的定点突变 | 第67页 |
| ·木聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第67页 |
| ·木聚糖酶活和蛋白质浓度的测定 | 第67-68页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第68页 |
| ·结果 | 第68-76页 |
| ·木聚糖酶基因的克隆 | 第68-74页 |
| ·PCR 结果 | 第68-72页 |
| ·草菇基因组木聚糖酶全序列的获得 | 第72-74页 |
| ·Xyn3 序列的定点突变 | 第74页 |
| ·木聚糖酶表达质粒的构建 | 第74-75页 |
| ·重组质粒及转化子的鉴定分析 | 第75页 |
| ·木聚糖酶在大肠杆菌中的表达 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| ·木聚糖酶的克隆 | 第76-77页 |
| ·木聚糖酶的表达 | 第77-78页 |
| ·小结 | 第78页 |
| 参考文献 | 第78-80页 |
| 第四章 β-葡萄糖苷酶的克隆、表达与定性 | 第80-99页 |
| ·材料与方法 | 第81-86页 |
| ·菌株与质粒 | 第81-82页 |
| ·主要试剂 | 第82页 |
| ·PCR 引物 | 第82页 |
| ·培养基和培养条件 | 第82页 |
| ·主要仪器设备 | 第82页 |
| ·基因操作 | 第82-83页 |
| ·葡萄糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第83页 |
| ·重组酶的纯化 | 第83-84页 |
| ·粗酶液的制备 | 第83页 |
| ·DEAE–Sephacel 阴离子交换柱层析 | 第83页 |
| ·HW-55F-Toyopearl 分子筛 | 第83-84页 |
| ·重组酶的酶活性检测 | 第84页 |
| ·葡聚糖酶酶活测定方法 | 第84-85页 |
| ·重组酶的定性 | 第85-86页 |
| ·结果与讨论 | 第86-93页 |
| ·原核表达质粒的构建 | 第86-87页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶在大肠杆菌中的表达 | 第87-89页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶的纯化 | 第89-90页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶的定性 | 第90-93页 |
| ·酶分子质量的测定 | 第90页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶的最适反应条件 | 第90-91页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶的的稳定性 | 第91-92页 |
| ·金属离子、螯合剂和去污剂对重组β-葡萄糖苷酶的影响 | 第92页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶的底物特异性 | 第92-93页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶的酶促反应的动力学 | 第93页 |
| ·讨论 | 第93-96页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶的克隆 | 第93页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶在大肠杆菌中的表达 | 第93-95页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶的纯化和定性 | 第95-96页 |
| ·小结 | 第96页 |
| 参考文献 | 第96-99页 |
| 第五章 几丁质脱乙酰酶的克隆与表达 | 第99-115页 |
| ·材料和方法 | 第99-103页 |
| ·菌株与质粒 | 第99-100页 |
| ·主要试剂 | 第100页 |
| ·主要仪器设备 | 第100-101页 |
| ·培养基和培养条件 | 第101页 |
| ·基因操作 | 第101页 |
| ·序列比对 | 第101页 |
| ·全长CDA 基因的获得 | 第101页 |
| ·大肠杆菌重组表达载体的构建 | 第101-102页 |
| ·几丁质脱乙酰酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第102页 |
| ·包含体试验 | 第102页 |
| ·几丁质脱乙酰酶酶活测定 | 第102-103页 |
| ·反应底物 Glycol chitin 的制备 | 第102-103页 |
| ·几丁质脱乙酰酶酶活测定 | 第103页 |
| ·标准曲线 | 第103页 |
| ·结果与讨论 | 第103-110页 |
| ·已知阿拉伯糖苷酶基因的序列比对 | 第103-104页 |
| ·获得的几丁质脱乙酰酶基因的部分序列及其分析 | 第104页 |
| ·全长几丁质脱乙酰酶基因的获得 | 第104-107页 |
| ·草菇几丁质脱乙酰酶的序列分析 | 第107-108页 |
| ·原核高效表达质粒的构建和转化子的鉴定分析 | 第108页 |
| ·几丁质脱乙酰酶在大肠杆菌中的表达 | 第108-110页 |
| ·蛋白电泳检测 | 第108-109页 |
| ·包涵体实验 | 第109-110页 |
| ·活性检测 | 第110页 |
| ·讨论 | 第110-112页 |
| ·全长CDA基因的获得 | 第110-111页 |
| ·几丁质脱乙酰酶在大肠杆菌中的表达 | 第111-112页 |
| ·小结 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-115页 |
| 论文主要结论 | 第115-117页 |
| 论文创新点 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 攻读博士期间发表的论文清单 | 第119-120页 |
| 附录 | 第120-136页 |
