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海藻糖合酶基因转化佛手(Citrus medica L.var.sarcodactylis)方法的研究

中文摘要第1-7页
英文摘要第7-9页
缩略词表第9-14页
第一章 综述第14-31页
   ·佛手概况第14-17页
     ·佛手的品种及其特征第14页
     ·资源分布第14-15页
     ·真伪鉴别第15页
     ·观赏价值第15-16页
     ·药用价值第16页
     ·化学成分第16-17页
   ·植物遗传转化概述第17-18页
   ·果树遗传转化第18-20页
   ·主要基因转化方法第20-28页
     ·农杆菌(Agrobacterium)介导的基因转化方法第20-24页
       ·根癌农杆菌第20-21页
       ·根癌农杆菌Ti质粒第21-22页
       ·根癌农杆菌介导的基因转移机制第22-23页
       ·根癌农杆菌介导方法的优缺点第23-24页
     ·基因枪法第24-27页
       ·理化因素第25-26页
       ·生物因素第26-27页
       ·基因枪法进行遗传转化的优缺点第27页
     ·农杆菌介导法与基因枪法相结合的转化方法第27-28页
   ·海藻糖及海藻糖合酶基因简介第28-31页
     ·海藻糖的生物学功能第28页
     ·海藻糖的应用前景第28-29页
     ·海藻糖合酶基因遗传转化的研究进展第29-31页
引言第31-32页
第二章 实验材料与实验方法第32-42页
   ·实验材料第32页
     ·植物材料第32页
     ·实验菌株第32页
   ·试剂及主要仪器第32-35页
     ·主要试剂第32页
     ·PCR 引物第32页
     ·培养基第32页
     ·常用的溶液第32-34页
       ·常用缓冲液及试剂的成分与配制第32-34页
       ·抗生素储备液第34页
       ·提取质粒DNA 所用试剂第34页
       ·提取植物DNA 所用试剂第34页
     ·主要仪器第34-35页
   ·实验方法第35-42页
     ·佛手高效再生系统的建立第35页
     ·转化受体选择压力的确定第35页
     ·农杆菌介导转化法第35-37页
       ·菌种的保存第35页
       ·菌种的活化和预处理第35页
       ·预培养时间对遗传转化效率的影响第35-36页
       ·佛手叶片与农杆菌共培养第36页
       ·侵染时间和浓度对遗传转化效率的影响第36页
       ·共培养时间对遗传转化效率的影响第36页
       ·乙酰丁香酮( AS)的添加对佛手转化效率的影响第36页
       ·除菌培养时间对遗传转化的影响第36页
       ·抑菌抗生素对叶片转化的影响第36页
       ·转化体的筛选及植株再生第36-37页
     ·基因枪法的遗传转化第37-39页
       ·质粒的大量提取和纯化第37页
       ·质粒DNA 的纯化第37页
       ·质粒的浓度及纯度检测第37-38页
       ·材料准备第38页
       ·基因枪轰击操作第38页
       ·试验采取的处理组合第38-39页
       ·真空度对转化效率的影响第39页
       ·轰击后恢复培养时间对转化效率的影响第39页
       ·转化体的筛选第39页
     ·GUS 活性的组织化学检测第39-40页
     ·植株的PCR 检测第40-42页
第三章 结果与分析第42-63页
   ·再生体系的建立第42-44页
     ·培养基类型对愈伤组织诱导的影响第42页
     ·生长素类对愈伤组织诱导的影响第42-44页
     ·植物激素组合对佛手愈伤组织诱导的效应第44页
   ·遗传转化体系的建立第44-55页
     ·卡那霉素敏感性实验第44-47页
     ·不同浓度卡那霉素(Km)对佛手愈伤组织分化的影响第47-48页
     ·预培养时间对遗传转化的影响第48页
     ·农杆菌感染时间和浓度对遗传转化的影响第48-50页
     ·菌液浓度对GUS 瞬时表达率的影响第50-51页
     ·不同抗生素的抑菌效果比较第51页
     ·羧苄青霉素和头孢霉素浓度的确定第51-52页
     ·共培养对遗传转化的影响第52-53页
     ·半胱氨酸的添加对佛手转化的影响第53页
     ·乙酰丁香酮( AS)的添加对佛手转化效率的影响第53-54页
     ·除菌培养时间对遗传转化的影响第54-55页
   ·基因枪转化条件初探第55-63页
     ·质粒的鉴定第55页
     ·氦气压力对GUS 瞬时表达的影响.第55-56页
     ·真空度对GUS 瞬时表达的影响第56-57页
     ·射程对GUS 瞬时表达的影响第57-59页
     ·GUS 瞬时表达检测时间的确定第59-61页
     ·轰击次数对GUS 瞬间表达的影响第61-62页
     ·抗性愈伤的分子生物学鉴定第62-63页
第四章 讨论第63-69页
   ·激素对佛手叶片愈伤组织诱导和分化的影响第63页
   ·愈伤组织增殖培养过程中应该注意的问题第63-64页
   ·转基因方法的确定第64页
   ·标记基因及选择剂的影响第64-65页
   ·影响农杆菌方法遗传转化的主要因素第65-67页
     ·农杆菌浓度对转化效率的影响第65页
     ·外植体的影响第65-66页
     ·预培养时间的影响第66页
     ·共培养的影响第66页
     ·液体除菌对遗传转化的影响第66-67页
     ·乙酰丁香酮(As)对遗传转化的影响第67页
   ·基因枪转化系统的优化第67-68页
   ·转化体的筛选及鉴定第68-69页
第五章 结论第69-70页
参考文献第70-77页
致谢第77-78页
作者简介第78页

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