| 缩写词 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| ·柑桔无核育种的研究进展 | 第10-13页 |
| ·无核柑桔的成因 | 第10-11页 |
| ·雄性不育 | 第10页 |
| ·胚囊不育 | 第10-11页 |
| ·自交不亲合 | 第11页 |
| ·胚的早期死亡 | 第11页 |
| ·柑桔无核育种的途径和方法 | 第11-13页 |
| ·传统的柑桔无核育种方法 | 第11-13页 |
| ·自然变异的选择 | 第11-12页 |
| ·人工诱变 | 第12页 |
| ·利用遗传性花粉败育品种作亲本进行杂交 | 第12页 |
| ·自交不亲合性的利用 | 第12页 |
| ·三倍体的培育 | 第12-13页 |
| ·基因工程手段控制种子发育获得柑桔无核品种 | 第13页 |
| ·高等植物启动子研究进展 | 第13-19页 |
| ·高等植物启动子的基本组成 | 第13-15页 |
| ·转录起始位点 | 第13-14页 |
| ·TATA box | 第14页 |
| ·一般上游启动子元件 | 第14页 |
| ·特有上游启动子元件 | 第14-15页 |
| ·高等植物启动子的基本类型及其应用 | 第15-19页 |
| ·组成型启动子及其应用 | 第15-16页 |
| ·组织特异型启动子及其应用 | 第16-17页 |
| ·诱导型启动子 | 第17-18页 |
| ·双向启动子、可变启动子和串联启动子 | 第18-19页 |
| ·柑桔种子贮藏蛋白球蛋白及其相关基因的研究 | 第19-20页 |
| ·种子贮藏蛋白的种类和性质 | 第19页 |
| ·柑桔种子贮藏蛋白及其基因的研究 | 第19-20页 |
| ·种子球蛋白基因的表达调控 | 第20页 |
| ·种子球蛋白基因的应用 | 第20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-36页 |
| ·试验材料 | 第21-22页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌种和质粒 | 第21页 |
| ·分子生物学及生化试剂 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·烟草组织培养培养基 | 第21-22页 |
| ·细菌培养基 | 第22页 |
| ·引物序列 | 第22页 |
| ·试验方法 | 第22-36页 |
| ·锦橙种子贮藏蛋白基因上游调控区的克隆及测序 | 第22-28页 |
| ·植物基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·加接头的染色体步移 | 第23-24页 |
| ·DNA片段的回收 | 第24-25页 |
| ·扩增片段与pGEMT-Easy的连接 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第26页 |
| ·细菌质粒DNA的制备 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第27页 |
| ·序列测定 | 第27页 |
| ·GUS组织化学检测 | 第27-28页 |
| ·锦橙citrin上游调控区全长及缺失片段与gus融合表达载体的构建 | 第28-33页 |
| ·锦橙citrin全长植物表达载体p-A-gus的构建 | 第28-29页 |
| ·中间载体pT-A的构建 | 第28页 |
| ·植物表达载体p-A-gus的构建 | 第28-29页 |
| ·锦橙citrin上游调控区缺失片段与gus融合的植物表达载体构建 | 第29-33页 |
| ·植物表达载体p-B-gus和p-D-gus的构建 | 第30-31页 |
| ·植物表达载体p-C-gus和p-N-gus的构建 | 第31-33页 |
| ·植物表达载体转化根癌农杆菌 | 第33-34页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第34页 |
| ·农杆菌的转化 | 第34页 |
| ·烟草的转化及再生 | 第34-35页 |
| ·烟草转基因再生植株的鉴定 | 第35-36页 |
| ·烟草基因组DNA的制备 | 第35页 |
| ·转基因烟草再生植株的PCR鉴定 | 第35页 |
| ·转基因烟草再生植株的GUS鉴定 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-43页 |
| ·锦橙种子球蛋白基因的上游调控区的扩增和克隆 | 第36-37页 |
| ·锦橙种子球蛋白基因的上游调控区的序列分析 | 第37-40页 |
| ·PCR扩增片段的同源性分析 | 第37页 |
| ·锦橙种子球蛋白基因上游调控区序列数据库分析 | 第37-40页 |
| ·锦橙种子贮藏蛋白基因(citrin)上游调控区全长及缺失片段与gus融合表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·p-A-gus在转基因烟草中的表达 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-50页 |
| ·试验材料的选择 | 第43页 |
| ·加接头的染色体步移技术的条件优化 | 第43-46页 |
| ·巢式PCR | 第43-44页 |
| ·降落PCR | 第44页 |
| ·热启动PCR | 第44-45页 |
| ·两步PCR | 第45页 |
| ·混合型DNA聚合酶的应用 | 第45-46页 |
| ·柑桔种子球蛋白基因在甜橙不同品种间的同源性分析 | 第46页 |
| ·锦橙种子球蛋白基因上游序列的分析 | 第46-48页 |
| ·具备真核细胞基因启动子的基本特征 | 第46页 |
| ·具备在种子中特异表达的顺式元件 | 第46-47页 |
| ·具备与种子发育相关的调控序列 | 第47-48页 |
| ·锦橙种子球蛋白基因上游序列缺失载体的构建策略 | 第48页 |
| ·锦橙种子球蛋白基因上游调控序列在转基因烟草中的表达调控功能 | 第48-49页 |
| ·转基因技术获得无核性状的前景 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 图版 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 发表论文目录 | 第61-62页 |
| 附件 扩增片段测序报告 | 第62-69页 |
