| 致谢 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 1 引言 | 第13-18页 |
| ·研究背景 | 第13页 |
| ·Onconase结构及优越性 | 第13-14页 |
| ·Onconase对肿瘤细胞具有选择性杀伤能力 | 第14页 |
| ·Onconase降解tRNA | 第14页 |
| ·Onconase进入细胞的方式 | 第14-15页 |
| ·Onconase的细胞毒性 | 第15页 |
| ·Onconase的发展前景 | 第15页 |
| ·研究目的和内容 | 第15-16页 |
| ·研究目的 | 第15-16页 |
| ·研究内容 | 第16页 |
| ·技术路线 | 第16-18页 |
| 2 实验材料 | 第18-23页 |
| ·质粒载体 | 第18页 |
| ·细菌菌株 | 第18页 |
| ·细胞株 | 第18页 |
| ·主要工具酶及试剂 | 第18-19页 |
| ·主要试剂盒及耗材 | 第19页 |
| ·主要试剂的配制 | 第19-21页 |
| ·细菌培养试剂配制 | 第19页 |
| ·核酸电泳缓冲液的配制 | 第19页 |
| ·穿梭质粒Bacmid大量提取试剂 | 第19页 |
| ·蛋白质电泳所用试剂及缓冲液的配制 | 第19-21页 |
| ·其它试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21-23页 |
| 3 实验方法 | 第23-39页 |
| 第一部分 Onconase原核表达及纯化复性 | 第23-30页 |
| ·原核表达系统Onconase表达、纯化及复性 | 第23-30页 |
| ·克隆载体pMD18-T-Onconase的获得及扩增 | 第23-24页 |
| ·原核表达质粒pET-30a(+)-Onconase构建 | 第24-26页 |
| ·蛋白Onconase的表达 | 第26-27页 |
| ·蛋白Onconase鉴定 | 第27-29页 |
| ·包涵体变性 | 第29页 |
| ·蛋白Onconase变性纯化 | 第29-30页 |
| ·蛋白Onconase溶解复性 | 第30页 |
| 第二部分 真核表达及纯化 | 第30-39页 |
| ·真核表达系统Onconase的表达及纯化 | 第30-39页 |
| ·克隆载体pMD18-T-Onconase的获得及扩增 | 第30-31页 |
| ·全长Onconase基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·供体质粒pFastBacI-Onconase的构建 | 第32-34页 |
| ·Bacmid-Onconase的构建 | 第34-35页 |
| ·Bacmid-Onconase的提取 | 第35页 |
| ·Bacmid-Onconase的鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组杆状病毒的获得 | 第36页 |
| ·重组杆状病毒的收集 | 第36-37页 |
| ·重组杆状病毒的扩增 | 第37页 |
| ·His-Onconase融合蛋白的表达 | 第37页 |
| ·His-Onconase的检测 | 第37页 |
| ·His-Onconase的纯化 | 第37-39页 |
| 4 实验结果 | 第39-46页 |
| ·原核表达系统Onconase的表达及纯化复性 | 第39-42页 |
| ·原核表达质粒pET-30a(+)-Onconase的构建 | 第39页 |
| ·融合蛋白的表达与纯化 | 第39-42页 |
| ·真核表达系统 | 第42-46页 |
| ·真核表达质粒pET-30a(+)-Onconase的构建 | 第42-43页 |
| ·重组穿梭载体Bacmid-Onconase的构建及鉴定 | 第43-44页 |
| ·His-Onconase的获得、纯化及鉴定 | 第44-46页 |
| 5 实验讨论 | 第46-48页 |
| ·His-Onconase原核表达及纯化 | 第46页 |
| ·His-Onconase真核表达及纯化 | 第46页 |
| ·Ni-NTA纯化条件 | 第46-48页 |
| 6 实验结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| 附录 | 第51-52页 |
| 作者简历 | 第52-54页 |
| 学位论文数据集 | 第54页 |
