| 中文摘要 | 第1-3页 |
| 英文摘要 | 第3-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 前言 | 第7-9页 |
| 材料与方法 | 第9-41页 |
| 1 实验材料 | 第9-10页 |
| ·病毒、细胞、质粒和菌株 | 第9页 |
| ·主要试剂 | 第9页 |
| ·主要仪器 | 第9-10页 |
| 2 实验方法 | 第10-41页 |
| ·细胞培养液，维持液和冻存液的配制 | 第10页 |
| ·培养基的配制 | 第10-11页 |
| ·PCR引物合成 | 第11-12页 |
| ·病毒的培养及收获 | 第12-14页 |
| ·病毒总RNA的提取 | 第14-15页 |
| ·RT-PCR扩增S基因 | 第15-16页 |
| ·S基因克隆到pGEM-T-Easy载体中 | 第16-21页 |
| ·S基因毕赤酵母分泌表达载体的构建 | 第21-31页 |
| ·重组质粒转化毕赤酵母菌 | 第31-37页 |
| ·重组菌株目的蛋白的诱导表达(小量培养) | 第37页 |
| ·表达产物鉴定 | 第37-41页 |
| 结果 | 第41-60页 |
| 1 汉坦病毒培养 | 第41页 |
| 2 汉坦病毒Z10株和L99株S基因RT-PCR扩增结果 | 第41页 |
| 3 S基因克隆到pGEM-T-Easy载体中及鉴定 | 第41-43页 |
| ·Z10株S基因T-A克隆鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·L99株S基因T-A克隆鉴定结果 | 第42-43页 |
| 4 汉坦病毒S基因毕赤酵母分泌表达载体的构建及鉴定 | 第43-53页 |
| ·Z10株S基因定向克隆鉴定结果 | 第43-44页 |
| ·L99株S基因定向克隆鉴定结果 | 第44-46页 |
| ·汉坦病毒S基因序列分析 | 第46-53页 |
| 5 重组质粒转化毕赤酵母菌 | 第53-56页 |
| ·重组质粒的线性化 | 第53页 |
| ·重组菌株的鉴定 | 第53-56页 |
| 6 表达产物鉴定 | 第56-60页 |
| ·SDS-PAGE结果 | 第56-59页 |
| ·Dot blot鉴定表达产物抗原性 | 第59-60页 |
| 讨论 | 第60-70页 |
| 1 汉坦病毒感染的流行病学 | 第60-61页 |
| 2 汉坦病毒的分子生物学 | 第61-63页 |
| 3 毕赤酵母表达系统 | 第63-66页 |
| 4 汉坦病毒S基因的克隆与表达 | 第66-70页 |
| 小结 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-74页 |
