综述:生物固氮中心调节因子NifA蛋白的结构、功能及其调控 | 第1-6页 |
引言 | 第6-31页 |
1. nifA基因的产物NifA蛋白的功能 | 第7-11页 |
2. NifA蛋白的结构及各个结构域的功能 | 第11-13页 |
2.1 N末端结构域具有调节功能 | 第11-12页 |
2.2 中心结构域具有催化功能 | 第12-13页 |
2.3 C末端结构域具有DNA结合功能 | 第13页 |
2.4 连接区(interdomainlinker)具有感受氧信号的功能 | 第13页 |
3. 温度、铵、氧对NifA蛋白的调控 | 第13-24页 |
3.1 温度对NifA蛋白的调控 | 第14页 |
3.2 铵与氧对NifA蛋白的调控 | 第14-24页 |
3.2.1 NifL | 第16-17页 |
3.2.2 NtrB-NtrC | 第17-19页 |
3.2.3 PII | 第19-21页 |
3.2.4 FixL-FixJ,FixK,FixT | 第21-22页 |
3.2.5 RegRS | 第22-23页 |
3.2.6 HvrA(一种可能的调节因子 | 第23-24页 |
结束语 | 第24-26页 |
参考文献 | 第26-31页 |
论文第一部分:NifA中心结构域多聚功能结构基础的分析 | 第31-53页 |
中文摘要 | 第32-33页 |
英文摘要 | 第33-41页 |
引言 | 第34-36页 |
材料与方法 | 第36-41页 |
1. 菌株与质粒 | 第36页 |
2. 培养基与抗生素 | 第36-37页 |
3. 质粒的制备与转化 | 第37-38页 |
4. PCR | 第38页 |
5. 引物 | 第38-39页 |
6. MBP融合蛋白的表达和SDS-PAGE凝胶电泳 | 第39-40页 |
7.β-半乳糖苷酶活性分析 | 第40-41页 |
结果与讨论 | 第41-51页 |
1. Val残基替换C3区中的Thr残基使得NifA中心结构域丧失转录激活功能 | 第41-44页 |
1.1 nifA基因点突变型的构建 | 第42-43页 |
1.2 点突变型nifA基因产物活性的鉴定 | 第43-44页 |
2. NifA中心结构域点突变型的部分二倍体实验 | 第44-45页 |
3. NifA中心结构域的各种缺失突变型的部分二倍体实验 | 第45-51页 |
参考文献 | 第51-53页 |
论文第二部分:多拷贝SmnifA与EcnifA在苜蓿中华根瘤菌中功能差异的研究 | 第53-83页 |
摘要 | 第54-55页 |
Abstract | 第55-57页 |
引言 | 第57-59页 |
材料与方法 | 第59-66页 |
1. 菌株、质粒与引物 | 第59-61页 |
2. 培养基与抗生素 | 第61-62页 |
3. PCR | 第62页 |
4. 质粒的分离制备、酶切、电泳、连接、转化 | 第62页 |
5. 半乳糖苷酶活性分析 | 第62页 |
6. 根瘤菌总RNA的抽提 | 第62-63页 |
7. RT-PCR | 第63页 |
8. 双亲本杂交法 | 第63页 |
9. 固氮酶活性及植株鲜重的测定 | 第63-65页 |
10. 氨基酸序列同源性分析 | 第65-66页 |
结果与讨论 | 第66-83页 |
1. 多拷贝nifA基因对苜蓿中华根瘤菌固氮功效的促进作用 | 第66-76页 |
1.1 组成型表达的nifA基因的构建及其产物活性的鉴定 | 第66-67页 |
1.2 组成型表达的nifA基因对苜蓿中华根瘤菌nifA突变株中的互补 | 第67-75页 |
1.2.1 苜蓿中华根瘤菌nifA突变型菌株的构建与鉴定 | 第67-69页 |
1.2.2 SmnifA基因与EcnifA基因对SmY的互补 | 第69-71页 |
1.2.3 SmnifA基因不能完全互补SmY的结瘤固氮表型 | 第71-75页 |
1.3 多拷贝nifA基因对Sm1021固氮能力的促进 | 第75-76页 |
2. SmNifA与EcNifA功能差异的分析 | 第76-83页 |
2.1 SmNifA与EcNifA氨基酸序列同源性分析 | 第76-77页 |
2.2 结构域缺失的NifA蛋白及融合蛋白的构建与功能分析 | 第77-83页 |
2.2.1 N末端结构域的缺失与置换 | 第77-78页 |
2.2.2 C末端结构域的缺失与置换 | 第78-79页 |
2.2.3 在中心结构域发生置换 | 第79页 |
2.2.4 结构域缺失NifA蛋白与融合蛋白的功能 | 第79-83页 |
参考文献 | 第83-86页 |
总结与展望 | 第86-88页 |
发表文章目录 | 第88-89页 |
致谢 | 第89-90页 |